陈 婵，黄晓梅，刘彩珍，黄 靖，熊世英

（福建农业职业技术学院，福建福州 350119）

0 引言

佛手 （Citrus medica L，Var.Sarcodactylis），又名“佛手柑”“佛手香橼”“福寿橘”等，为芸香科柑橘属植物佛手的果实，佛手果实成熟后呈黄色，其性温味辛，苦、酸，入肝、脾、肺、经，具有较高的药用价值[1-2]。在我国，佛手根据产地的不同，主要有广东和广西的“广佛手”、四川的“川佛手”、浙江的“金佛手”、福建的“建佛手”[3]。有关金佛手与广佛手研究资料较多，而建佛手的研究相对较少。

近年来，佛手中挥发油[4]、总黄酮[5-6]、多糖[7-9]等有效成分的提取分离和功效都取得较大进展，佛手的药用价值依然为研究热点，传统中药一般采用水熬煮的方法，其中水溶性化合物为主要成分。佛手多糖按提取部位不同可分为佛手果实多糖和佛手叶多糖。目前，常用于多糖提取的方法主要有热水浸提法[10]、复合酶提取法[11]、超声波辅助提取法[12]、微波辅助提取法[13]等，热水水提法虽然耗时长、提取率相对低，但其操作简便且成本低廉，是国内外多糖提取最常用的方法。以福建佛手为原料，研究热水浸提法提取佛手多糖的最优工艺，以期获得较高的粗多糖得率，为福建佛手资源的进一步开发利用提供理论依据。

1 材料仪器与方法

1.1 材料与试剂

佛手，产自向阳贤芳佛手；葡萄糖、苯酚、无水乙醇、硫酸，均为分析纯。

1.2 主要仪器

BS210S型电子天平，塞多利斯北京天平有限公司产品；BL1025A型多功能料理机，广东美的生活电器制造有限公司产品；722S型可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品；KQ-300VDV型三频数控超声波清洗机，昆山超声仪器有限公司产品；TDL-5型低速台式大容量离心机，上海安亭科学仪器厂产品。

1.3 方法

1.3.1 多糖含量的测定方法[14]

采用苯酚硫酸法：精确称取干燥恒质量后的葡萄糖10 mg，用蒸馏水定容至250 mL，分别吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8 mL，各以蒸馏水补至2.0 mL，加入6%苯酚水溶液1.0 mL后迅速加入浓硫酸5.0 mL，摇匀冷却，于室温下放置20 min后在波长490 nm处测定吸光度，以0管作空白对照，得出线性方程。

将样品溶液多糖浓度调整至测定范围，精确吸取1.0 mL按上述步骤操作，每个样品液重复测定3次，测定吸光度，并计算建佛手中多糖含量。

1.3.2 建佛手粗多糖的提取工艺

将佛手果实清洗、烘干至恒质量，粉碎，过20目筛。粉碎过筛后的建佛手按照料液比为1∶20～1∶100加入蒸馏水浸泡20 min，按提取温度为60～100℃，提取时间为30～240 min提取粗多糖，提取液以转速4 000 r/min离心15 min，取上清液定容至100 mL，测定佛手多糖的含量，并计算佛手多糖得率。计算公式如下：

式中：C——经过稀释后测定的多糖含量，μg；

V1——提取后得到的上清体积，mL；

N——稀释倍数；

V2——用于测定的上清体积，mL；

m——用于提取的银耳质量，mg。

1.3.3 正交试验设计

根据单因素试验最终结果确定正交试验表，以正交试验确定佛手果中粗多糖的最佳提取工艺参数。

准确称取1 g烘干后的佛手干粉5份，以正交试验得出的最佳提取工艺进行5次平行试验，分别按照1.3.1中的方法进行多糖含量的测定，以验证正交试验结果。

1.3.4 数据分析

应用DPS数据处理系统进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

根据标准曲线测定方法，计算后得出线性方程：Y=0.073 3X-0.001 7，R2=0.999 6。

多糖标准曲线见图1。

图1 多糖标准曲线

2.2 料液比对建佛手粗多糖提取率的影响

准确称取1 g的佛手粉，分别选用佛手物料与蒸馏水比例（料液比） 为1∶20，1∶40，1∶60，1∶80，1∶100时，提取温度为80℃条件下提取1 h，考查料液比对建佛手粗多糖提取率的影响。

料液比对佛手多糖提取率的影响见图2。

图2 料液比对佛手多糖提取率的影响

由图2可知，料液比对建佛手粗多糖提取率有较大的影响，料液比为1∶20～1∶60时，料液比增加佛手多糖的提取率提高。当料液比继续提高到1∶80时，多糖的提取率开始略有下降。

2.3 提取温度对建佛手粗多糖提取率的影响

精确称量建佛手干粉，在料液比为1∶80，分析提取温度在60，70，80，90，100℃条件下提取1 h，得出建佛手粗多糖最佳提取时间。

提取温度对佛手多糖提取率的影响见图3。

图3 提取温度对佛手多糖提取率的影响

由图3可知，在1 h提取时间内，温度越高越有利于佛手粗多糖的提取。在100℃条件下多糖提取率为3.99%，而60℃条件下提取时提取率为3.14%，提取率提高21%左右。

2.4 提取时间对建佛手粗多糖提取率的影响

称取定量建佛手样品，在料液比1∶80，提取温度 80 ℃时，提取 30，60，90，120，150，180，210，240 min，得出佛手粗多糖提取的最优提取时间。

提取时间对佛手多糖提取率的影响见图4。

由图4可知，在80℃条件下，提取时间越长，佛手多糖的提取率越高。当提取时间为150 min时，提取率增加幅度开始减缓，提取时间240 min时，提取率开始下降。

图4 提取时间对佛手多糖提取率的影响

2.5 正交试验分析

根据单因素试验的结果，选用表1中正交因素及水平进行正交试验，得出建佛手粗多糖的最佳工艺提取条件。

正交试验因素与水平设计见表1，正交试验结果见表2。

表1 正交试验因素与水平设计

表2 正交试验结果

通过方差分析判断正交试验数据中3种受控制因素对试验结果的影响。

正交设计方差分析见表3。

结果表明，建佛手多糖的提取工艺中，料液比及提取温度对佛手多糖的提取率影响显著，提取时间影响无明显显著性。从提取温度影响的单因素试验结果分析，提取时间越长，提取率越高，而正交试验中提取时间并未明显显著，可能原因在于在正交试验中选用提取时间的水平均为2 h后，而2 h前提取率增长速度快，2 h后提取率增幅不大。热水浸提法提取佛手粗多糖最佳提取工艺条件为A3B1C3D2，即料液比1∶80，提取温度80℃，提取时间180 min，此时提取率为4.45%。验证试验结果与正交试验的结果一致。表明水提法提取建佛手多糖，工艺简单、稳定，相对标准偏差小、数据准确。

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表3 正交设计方差分析

3 结论

福建佛手中富含多糖物质，采用热水浸提的方法，在料液比1∶80，提取温度80℃，提取时间180 min的条件下，佛手多糖的提取率可达4.45%。热水浸提法对多糖结构影响较小，且工艺简单、可操作性强。