陈 炯 詹 飞 冯 巍

(河南科技大学法医学院，洛阳 471023)

人类载脂蛋白6 (human lipocalin 6，hLCN6) 是新发现的一类附睾特异性表达并分泌的载脂家族蛋白，能与精子头部和尾部结合，与精子成熟有关[1]。本实验室曾构建了抗hLCN6杂交瘤细胞株1B2，分泌鼠源单克隆抗体具有较高的组织特异性与灵敏度[2]，可用于精子的免疫荧光检测。目前，hLCN6单克隆抗体 (hLCN6 mAb) 偶联的免疫磁珠可有效用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定[3]。与传统单抗相比，小分子重组抗体因分子量小、易于进行基因工程操作而备受重视[4-6]，包括单链抗体 (scFv)、双价单链抗体 (bsFv) 和嵌合抗体Fab片段，既保留了亲本抗体所具有的高亲和力和特异性，又简单经济且易于改造，是基于抗原-抗体相互作用分离精子的理想材料。本研究通过构建抗hLCN6全套鼠源scFv噬菌体抗体文库，筛选亲和力和特异性较好的抗hLCN6 scFv,并进行原核表达纯化和鉴定,为后期规模化制备该抗体偶联的免疫磁珠、法医混合斑中精细胞的分离奠定了基础。

1 材料与方法

1.1材料 按照知情同意原则，实验用精液样本及女性口腔上皮细胞样本，分别由本实验室健康成年男性和女性志愿者提供。BALB/c小鼠购自中科院上海实验动物中心；大肠杆菌Escherichiacoli(E.coli)Rosetta(DE3)、pET-28a质粒、hLCN6抗原及小鼠抗hLCN6 mAb 1B2由本室保存或制备；噬菌体载体pFAB5C购自Biovector公司；E.coliXL1-Blue和辅助噬菌体M13KO7购自美国Stratagene公司；Triziol试剂和反转录试剂盒购自Invitrogen公司；膜蛋白提取试剂盒购自美国Biovision公司；Sulfo-NHS-LC-Biotin、DynabeadsTMM-280 Streptavidin和HRP-Streptavidin试剂盒购自Thermo Fisher公司；鼠抗噬菌体M13抗体、HRP-羊抗鼠IgG、BCA蛋白定量试剂盒和增强型化学发光底物 (ECL) 购自Pierce公司；……