王辰飞，刘波，张常欢，王建英，苏明

（温州医科大学眼视光学院生物医学工程学院，浙江温州325035）

肾癌（renalcellcarcinoma，RCC）是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，而透明细胞癌是其最常见的病理类型。目前，肾透明细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC）的发病率正在逐年上升，手术仍是治疗早期RCC的主流方式，而针对晚期RCC则主要以化疗以及靶向治疗为主，但其治疗效果较差[1]。因此研究预测RCC患者预后的生物标志物以及治疗的靶点对于提高RCC患者的生存预后尤为重要[2]。

长链非编码RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸的RNA，因其缺乏完整的开放阅读框架，所以不具有编码蛋白质的功能[3-4]。研究表明lncRNA在肿瘤的发生发展中发挥着重要的调控作用[5]。LINC00460是一种位于人类13号染色体上的lncRNA，研究发现其在多种肿瘤中异常表达，如在结直肠癌中LINC00460是明显过表达并且与结直肠癌患者的预后更差相关，其可以通过作为miR-939-5p的分子海绵来促进LIMK2的表达，从而促进结直肠癌细胞的增殖、迁移以及侵袭[6]。然而，LINC00460在人ccRCC中的表达及其作用机制目前尚未明确。本研究通过癌症基因组图谱（thecancergenomeatlas，TCGA）数据库分析了LINC00460在ccRCC组织中的表达情况，并探讨其与RCC患者的临床病理参数及预后的关系，为研究RCC的发病机制及预测预后提供一定的参考依据。

1 资料和方法

1.1 资料来源 通过TCGA数据库（https://portal.gdc.cancer.gov/）收集611例ccRCC及癌旁组织的转录组数据（HTSeq-FPKM）文件（其中癌组织539例，正常或癌旁对照组72例）和537例ccRCC患者的临床信息文件。纳入标准：①具备完整的转录组数据；②具备完整的临床信息（包括随访信息以及临床参数信息）。我们根据患者的ID号进行匹配并进一步整理了这些临床信息文件后，共得到530例具有完整临床信息的ccRCC患者（见表1）。

1.2 统计学处理方法 采用R语言软件进行数据分析。组间比较采用Wilcoxon检验或Kruskal-Wallis检验。采用logistic回归来分析LINC00460与临床病理参数之间的关系，采用Kaplan-Meier方法计算生存率，绘制生存曲线。采用Cox回归模型来分析独立的预后因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 530例ccRCC患者的临床信息

2 结果

2.1 LINC00460在ccRCC组织中的表达 通过Wilcoxon检验分析539例ccRCC和72例癌旁组织之间LINC00460的表达差异，结果显示LINC00460在癌组织中表达较癌旁组织明显升高，差异有统计学

意义（P＜0.05），见图1A。进一步分析配对的72例癌组织和癌旁组织中LINC00460的表达，结果显示LINC00460在癌组织中表达较癌旁组织明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），见图1B。

2.2 LINC00460在不同临床参数患者间的表达 通过Wilcoxon检验或Kruskal-Wallis检验分析了不同临床参数患者之间LINC00460的表达情况，结果显示随着病理学分期、T分期、N分期、M分期以及组织学分级的升高LINC00460的表达也升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。另外LINC00460在男性中表达较女性高，差异有统计学意义（P＜0.05）。而LINC00460在不同年龄段之间的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2。

图1 LINC00460在ccRCC组织中的表达

图2 LINC00460在不同临床参数患者间的表达

为了进一步验证LINC00460的表达与患者临床参数的相关性，我们根据LINC00460表达值的中位数进行高低分组作为因变量，以临床参数作为自变量进行logistic回归分析，结果显示，LINC00460高表达与更高的病理学分期、T分期、N分期、M分期和组织学分级相关；LINC00460高表达与性别相关，与年龄无关。见表2。

2.3 Kaplan-Meier生存分析 根据LINC00460的表达值的中位数将所有的患者分为高LINC00460表达组和低LINC00460表达组。采用Kaplan-Meier生存分析2 组患者的总生存率（overallsurvival，OS）以及无病生存率（disease-freesurvival，DFS)，结果显示高LINC00460表达组的OS和DFS较低LINC00460表达组更差，差异有统计学意义（P＜0.05），见图3。

2.4 Cox回归分析 采用单因素以及多因素Cox回归对所有患者进行总生存以及无病生存分析。单因素Cox回归分析结果表明，年龄、病理学分期、T分期、M分期、组织学分级和LINC00460均与患者的总生存明显相关。多因素Cox回归分析证实，年龄、病理学分期、组织学分级和LINC00460均是影响患者总生存的预后因素（见表3）。单因素Cox回归分析结果表明，病理学分期、T分期、M分期、组织学分级和LINC00460均与患者的无病生存明显相关。多因素Cox回归分析证实，病理学分期和组织学分级是影响患者无病生存的预后因素（见表4）。

表2 logistic回归分析LINC00460在不同临床参数患者间的表达

图3 ccRCC患者的Kaplan-Meier生存分析

3 讨论

LINC00460可参与多种肿瘤的发生发展。在胃癌中，LINC00460在癌组织中的表达较癌旁组织明显升高，细胞学和分子机制研究表明其可以通过竞争性结合miR-342-3p来促进KDM2A的表达从而促进胃癌细胞的增殖、迁移以及侵袭[7]。另外，ZHANG等[8]的研究发现LINC00460的表达还与胃癌患者的OS和DFS明显相关，LINC00460过表达的患者其总生存以及无病生存更差，进一步研究发现LINC00460可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路来促进胃癌细胞的增殖及迁移。在头颈部鳞状细胞癌中，LINC00460在癌组织中的表达也较癌旁组织表达明显增加，并且其表达的增加可能与癌细胞的凋亡和自噬相关，LINC00460的沉默可以明显抑制STC2、AKT、ERK的表达，从而引起癌细胞发生凋亡和自噬[9]。在卵巢癌中，LINC00460在癌组织中的表达也较癌旁组织表达明显升高，并且LINC00460的高表达与卵巢癌患者的预后明显相关，LINC00460高表达的患者具有高的转移率和低的OS，细胞学功能实验证明LINC00460 的过表达可通过竞争性结合miR-338-3p来促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而沉默LINC00460可明显抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移[10]。在肺腺癌中，LINC00460在癌组织中表达也较癌旁组织明显增加，通过细胞学实验发现LINC00460的过表达可以竞争性结合miR-302c-5p并促进FOXA1信号通路的激活来促进肺腺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭，而敲低LINC00460则可导致miR-302c-5p表达上升和FOXA1信号通路激活的抑制，从而引起肺腺癌癌细胞增殖和迁移抑制[11]。此外，LINC00460的表达还与肿瘤的耐药相关，在非小细胞肺癌中，LINC00460的过表达与非小细胞肺癌对吉非替尼耐药明显相关，LINC00460可以通过作为miR-769-5p的分子海绵来促进EGFR（miR-769-5p的靶基因）表达，从而促进非小细胞肺癌耐药的发生[12]。由此可见，LINC00460主要是作为一种促癌lncRNA来促进肿瘤的进展和耐药，并且其也与肿瘤患者的预后明显相关。

表3 单因素和多因素Cox回归分析（总生存）

表4 单因素和多因素Cox回归分析（无病生存）

在本研究中，通过分析LINC00460在ccRCC以及癌旁组织中的表达发现，LINC00460在ccRCC中表达也较癌旁组织明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。另外，通过分析LINC00460的表达与ccRCC患者临床参数的关系表明，其在高的肿瘤病理学分期、组织学分级、T分期、N分期和M分期中表达更高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。这些研究结果表明LINC00460的高表达可能促进ccRCC的进展及转移。此外，Kaplan-Meier生存分析结果显示，LINC00460高表达组患者较低表达组患者的总生存及无病生存更差，差异具有统计学意义（P＜0.05）。为了进一步证实LINC00460在预测ccRCC患者预后中的作用，我们使用了多因素Cox比例风险回归对患者的总生存预后进行分析，结果表明年龄、病理学分期、组织学分级和LINC00460均是影响患者总生存的预后因素。而无病生存预后的多因素Cox回归模型分析显示病理学分期和组织学分级是影响患者无病生存预后的因素。这些研究结果表明LINC00460可作为ccRCC的预后因子来预测ccRCC患者术后的总生存，但不能用于独立预测ccRCC患者术后的无病生存。

综上所述，LINC00460可能作为一个促癌lncRNA来调节ccRCC的发生发展，并且其可以作为预测ccRCC患者OS的生物标志物。然而本研究仍有不足之处：①本研究主要基于生物信息学分析的结果，缺乏确切的实验研究；②在本研究中LINC00460的表达不是影响患者无病生存的独立预后因子，可能与本研究中的样本量过少有关；③本研究中LINC00460是否可以作为ccRCC治疗的一个靶点，仍需要进一步分析。因此，我们的研究结果仍然需要大样本分析以及体内外分子机制实验来进一步探讨。