PUREVSUREN Lkhagvagarav，黄思嘉，张艳平，董小琳，魏泽辉

(西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100)

在成年母鸡的卵泡发育过程中，由颗粒细胞分泌的抗缪勒氏管激素(Anti-Müllerian hormone, AMH)能够通过抑制卵泡刺激素(Follicle stimulate hormone, FSH)对卵泡过度募集而限制初级卵泡的形成[1]。鸡卵巢包含许多不同发育阶段的卵泡：5到6个大黄卵泡(LYF，直径10-35 mm，从大到小依次称为F1-F6)、6到10个小黄卵泡(SYF，直径5～10 mm)、许多大白卵泡(LWF，直径1～5 mm)以及上千个小白卵泡(SWF，直径小于1 mm)[2-4]。卵泡由中央卵母细胞及其外周颗粒细胞层、膜细胞和结缔组织组成[5]。卵母细胞外周组织构成了卵泡膜，为生长中的卵母细胞提供支持和营养，并在类固醇激素的合成中起着重要作用[6-8]。在产蛋后1.5 h左右F1发生排卵，F2和其他卵泡依次在等级排列中推进一个位置，并且会有一个卵泡从前等级卵泡中选择出来成为等级卵泡。F1在排卵后进入输卵管，经过大约24 h后产蛋。在标准光照条件下，蛋鸡的产蛋时间通常被限制在7:30至16:00的8 h区间中，主要在10:00至12:00之间进行产蛋[9]。由于AMH对卵泡选择以及等级卵泡序列可能具有调控作用，因此也可能对产蛋时间有一定影响。AMH可能对鸡卵泡的生长和成熟具有重要的作用。因此，本研究通过比较不同浓度的AMH对产蛋量、产蛋时间和卵泡发育的潜在影响，分析AMH对蛋鸡繁殖性能的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计

试验选取的京红一号蛋鸡(29周龄)购自武功某蛋鸡场。首先预饲养10 d以缓解运输和饲养环境改变造成的应激，预饲养期间每天记录产蛋情况，根据产蛋情况选取正常高产的40只蛋鸡进行后续试验。每只蛋鸡单独笼养，自由饮水和采食，每天15 h的光照。将40只鸡随机分为4个处理组，每组10只：AMH150组(每天注射0.5 mL 150 ng/天 AMH)、AMH300组(每天注射0.5 mL 300 ng/天 AMH)、CON+组(每天注射0.5 mL无菌注射用水)、CON-组(无处理)。连续25 d于20点进行腿部肌肉注射。每天7:00至14:00每隔30 min观察一次产蛋情况并记录每只鸡的产蛋量。在第一次注射前和最后一次注射后分别对每只鸡进行称重，第26天折颈处死后采集卵泡(F1、SYF、LWF、SWF)(每组随机4只)浸泡于10%福尔马林溶液进行固定，用于组织学观察。

1.2 组织学观察

将采集的卵泡用石蜡进行包埋，用组织切片机(Leica RM2255，德国)切成厚度为5 μm的切片。切片用苏木精和伊红染色后通过显微镜进行观察，利用NIS-Elements D软件测量前等级卵泡与F1卵泡的颗粒细胞层和膜细胞层厚度，每张切片随机选取3个位置进行测量，取平均值进行分析。

1.3 统计分析

所有试验数据均采用SPSS 18.0软件进行统计分析。利用ANOVA对不同处理组的数据进行显著性差异分析。平均数分析四组正交比对(contrast)。采用t检验比较注射前和注射期间的产蛋量,以P<0.05表示差异显著。

2 结 果

2.1 注射不同浓度的AMH对产蛋时间的影响

在注射前饲养阶段和注射期间，记录每只鸡的产蛋时间。结果如图 1，2所示，注射前饲养期间有半数以上的母鸡产蛋时间在9:00之前，且注射不同浓度的AMH对蛋鸡产蛋时间无显著影响。

2.2 注射不同浓度的AMH对产蛋量的影响

注射前与注射期间产蛋量的结果如图3所示，在试验处理期间，CON+组的产蛋量显著下降(P< 0.05)，然而，AMH150组和AMH300组的产蛋量没有显著变化。

2.3 不同发育阶段卵泡膜的组织学观察

本研究利用NIS-Elements D软件对前等级卵泡(SWF、LWF、SYF)与F1卵泡的颗粒细胞层和膜细胞层厚度进行了测量(图4)。CON-组F1卵泡颗粒细胞层厚度与CON+组、AMH150组、AMH300组均差异显著(P<0.05)。四个处理组的前等级卵泡颗粒细胞层厚度和卵泡膜细胞层厚度均无显著差异。

3 讨 论

产蛋性状是鸡的重要经济性状，有序的卵泡发育等级是保证高产的重要基础，AMH对于卵泡生长成熟至关重要，但其在产蛋这一复杂过程中的作用仍不明确。本研究的主要目的是探讨不同浓度AMH处理对鸡繁殖性能的影响。研究表明,TGF-β信号通路参与调控卵泡选择的起始时期[10-12]。AMH是TGF-β家族的成员之一，是原始卵泡发育为生长卵泡阶段的主要调节因子[13]。AMH在鸡中的表达受到生长卵泡数量的限制，与哺乳动物相同的是AMH的表达量在卵泡选择后显著降低[4]。

本研究结果表明，注射不同浓度的AMH对产蛋量和产蛋序列没有显著影响，但结果分别呈现出下降和推迟的趋势。产蛋是一个复杂的过程，这一过程是由排卵前卵泡颗粒细胞的结构和功能支持的，颗粒细胞是卵巢中孕酮的主要来源，通过分泌孕酮调控鸡的产蛋过程[13-14]。然而，本研究的结果显示注射AMH对前等级卵泡的颗粒细胞层和膜细胞层的厚度没有显著影响。

禽卵泡由中心卵母细胞组成，卵母细胞膜，颗粒细胞层，卵泡膜细胞层及周围结缔组织依次包围卵母细胞[15]。鸟类和哺乳动物卵巢卵泡发育的过程与颗粒细胞层的功能分化紧密相关。颗粒细胞从未分化状态向分化状态的转变与卵泡选择直接相关[16]。了解注射AMH后母鸡卵泡不同发育阶段的组织学特征可为未来研究其发育、调控、选择和闭锁提供形态学依据。本研究测量了注射AMH后不同发育阶段卵泡的颗粒细胞层和膜细胞层的厚度，结果显示注射AMH后F1卵泡的颗粒层厚度减少。通过对所有卵巢卵泡石蜡切片的形态学分析，发现颗粒层随着前等级卵泡的发育而改变，尤其是它们的厚度。综上所述，AMH可能对鸡的卵泡发育和颗粒细胞功能有影响。本研究的结果有助于明确AMH在母鸡产蛋过程中的作用机理。

4 结 论

体内注射不同浓度的AMH会对产蛋母鸡的卵巢卵泡发育产生不同的影响。主要表现为注射AMH会降低由注射产生对产蛋的应激反应，并可导致F1卵泡中颗粒细胞层的厚度降低。说明体内注射AMH可能对鸡的卵泡发育和颗粒细胞功能有一定的影响。