张皓然 门燕娟 徐凤 陈全刚

摘 要：GC33是一种重组的全人源化单克隆抗体，可与磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3，GPC3）结合。为构建人源化GPC3抗体的CAR-T细胞，试验选择已有的GC33单链抗体序列成功构建了人源化GPC3-CAR分子，即GC33-CAR分子，并通过Western Blot对该CAR的表达进行验证，通过免疫荧光检查CAR的细胞定位。结果表明：GCC33-CAR分子能在T细胞中稳定表达且且该CAR表达后可被定位于细胞膜上。CAR-T细胞中CAR的人源化有望提升其治疗效果，本研究为下一步的临床研究提供了基础。

关键词：嵌合抗原受体细胞;肝细胞肝癌;人源化;磷脂同醇蛋白聚糖-3

引言

肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）目前是世界第5大肿瘤，也是癌症致死的第3大因素。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3，GPC3）是一种硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparin sulfate proteoglycans，HSPGs），在大多数的肝癌组织中呈特异性高表达，是一种较为理想的肿瘤治疗靶点。以GPC3为靶点治疗肝细胞癌的研究广泛开展，目前利用GPC3-CAR-T细胞治疗晚期肝细胞癌的Ⅰ期临床试验已正式启动（受理号：CXSL 1700203）。相关研究表明，鼠源scFV序列的免疫原性会导致CAR-T细胞在体内无法活化及持续存在。在卵巢癌及肾细胞癌的治疗过程中，针对鼠源scFV制备的CAR-T细胞的免疫应答导致了CAR-T细胞在输入患者体内后很快耗竭，持久性差，影响了治疗效果。GC33是一种重组的可与GPC3结合的全人源化单克隆抗体，一期临床试验结果显示GC33在HCC中有良好的耐受性，且与靶向GPC3的抗体相比丧失了对人类的免疫原性，因此，本研究构建了GC33-CAR-T细胞并对其进行了初步验证，为其后期应用于临床治疗奠定了基础。……