陈兵兵 宓晓晴 李云 谢俊霞 宋宁

[摘要] 目的 探究柠檬酸铁胺（FAC）对SH-SY5Y多巴胺能细胞系葡萄糖脑苷脂酶（GCase）活性及其蛋白表达的影响。方法 用FAC、GCase活性抑制剂环己烯四醇环氧化物（CBE）分别或共同处理细胞48 h，应用荧光法检测GCase活性，免疫印迹法检测GCase蛋白表达。结果 FAC和CBE两种因素共处理，对GCase活性及其蛋白表达的影响不存在交互作用（P>0.05）。FAC处理SH-SY5Y细胞后，GCase活性降低，蛋白表达升高，与对照组比较差异具有统计学意义（F=8.191、4.934，P<0.05）;CBE处理SH-SY5Y细胞后，GCase活性降低，蛋白表达升高，与对照组比较差异具有统计学意义（F=14.605、4.182，P<0.05）。结论 高铁可降低SH-SY5Y细胞中GCase的活性，升高蛋白的表达。

[关键词] 铁;柠檬酸盐类;葡糖苷酰鞘氨醇酶;SH-SY5Y细胞

[中图分类号] R338.1;R345.62  [文献标志码] A  [文章编号] 2096-5532（2020）02-0143-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.058 [开放科学（资源服务）标识码（OSID）]

[网络出版] http：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20200407.0930.004.html;2020-04-07 14：57

[ABSTRACT] Objective To explore the effect of ferric ammonium citrate （FAC） on glucocerebrosidase （GCase） activity and expression in SH-SY5Y dopaminergic cells.  Methods SH-SY5Y dopaminergic cells were treated with FAC and the GCase inhibitor conduritol B epoxide （CBE）， alone or in combination， for 48 h. Fluorometric assay was used to determine the GCase acti-vity. Western blotting was performed to determine the expression level of GCase.  Results When FAC and CBE were used in combination to treat the SH-SY5Y cells， there was no interaction between them with regard to the effect on GCase activity and expression （P>0.05）. SH-SY5Y cells treated with FAC alone showed a significantly decreased GCase activity and a significantly increased GCase expression level compared with the control group （F=8.191，4.934，P<0.05）; SH-SY5Y cells treated with CBE alone also showed a significantly decreased GCase activity and a significantly increased GCase expression level compared with the control group （F=14.605，4.182，P<0.05）.  Conclusion High level of iron can decrease the activity and increase the expression level of GCase in SH-SY5Y cells.

[KEY WORDS] iron; citrates; glucosylceramidase; SH-SY5Y cells

近年来遗传基因的发现为家族性和散发性帕金森病（PD）的发病机制提供新见解，有5%～10%的PD病例是遗传因素所致[1-2]。临床研究发现，PD病人中编码葡萄糖脑苷酯酶（GCase）的基因GBA突变率达20%，因此GBA突變是目前已知的PD和相关突触核蛋白病发展的最常见的遗传危险因素[3-5]。GCase是一种具有497个氨基酸的膜相关性蛋白，该蛋白在内质网中合成和经糖基化修饰后，被溶酶体膜整合蛋白-2转运至溶酶体中，发挥生物学功能[6]。GCase活性的降低可以导致葡萄糖神经酰胺的聚积，进而导致戈谢病的发生[7]。在PD中，GBA突变降低了GCase的活性，导致α-突触核蛋白聚集，而聚集的α-突触核蛋白又进一步促进了GCase活性的降低，形成恶性循环，造成多巴胺能神经元的死亡，因此GCase的活性与PD的发病进程密切相关[8-12]。铁是PD发病的重要因素之一[13]，铁可以诱导氧化应激和铁死亡等[14-16]，从而造成多巴胺能神经元的选择性损伤。然而……