邢作志，张 雁

(1 甘州区畜牧兽医工作站，甘肃 张掖 734000；2 张掖市农业综合行政执法队，甘肃 张掖 734000)

小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants，PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV)引起山羊和绵羊的一种急性接触性传染病，世界动物卫生组织将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。本病以发病率高和死亡率高为特点，严重威胁着畜牧业的发展。本次试验主要应用竞争ELISA、间接ELISA和阻断ELISA三种免疫抗体检测方法检测小反刍兽疫病毒的免疫抗体，以此评价小反刍兽疫疫苗的免疫效果。

1 试验材料

1.1 检测样品

血清样品采集自甘州区辖区内经小反刍兽疫活疫苗免疫的羊，要求清亮且无溶血。

1.2 试验器材

RT-6100酶标仪、37 ℃恒温箱、500 mL量筒、纯水仪、5 μL～50 μL单道移液器、10 μL～100 μL多道移液器、50 μL～300 μL多道移液器、配套移液枪头、加液槽和96孔抗原抗体反应板均为试验常用仪器，小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒、间接ELISA抗体检测试剂盒和阻断ELISA抗体检测试剂盒分别购自中国农业科学院兰州兽医研究所、深圳真瑞生物科技有限公司和青岛立见诊断技术发展中心。

2 试验方法

2.1 竞争ELISA抗体检测

2.1.1 加样

依次加入以下试剂及样品：① 待检血清，每份血清必须做两个重复孔，每孔加入待检血清样品50 μL；②对照，每块酶标板上均应设标准阴性血清、阳性血清、单克隆抗体及空白对照孔，其中标准阴性血清应设2孔，标准阳性血清应设2孔，每孔加入相应血清50 μL，空白对照设2孔，每孔加入100 μL血清稀释液，单克隆抗体对照设4孔，每孔加入50 μL血清稀释液；③加单抗，将单克隆抗体用血清稀释液进行1∶100倍稀释，除空白对照孔外其他各孔每孔加50 μL稀释后的单克隆抗体。……