徐倩容 杨里娜 艾黄萍 郑涛 左渝陵

牙周炎是累及牙周支持组织的一种炎症性、破坏性疾病，其中以慢性牙周炎最为常见，其最终会导致严重的牙周骨量丧失，牙齿松动，是成年人失牙的首位原因[1]。牙周炎属于中医学“牙宣”的范畴，历代文献中又可见齿槁、齿挺、齿动摇、牙漏等病名。患者会出现龈肉红肿、渗血渗脓、盲袋形成、牙根宣露、牙齿松动等临床症状[2]。本课题组前期针对妊娠性龈炎采用玄菊解毒凝胶辅助治疗后有明显改善[3]，而玄菊解毒合剂以漱口水的形式对慢性牙周炎的治疗效果如何，是否有临床应用价值，其原理如何，是本研究的重点。本研究通过观察治疗前后慢性牙周炎患者临床疗效，以及检测龈沟液白细胞介素-1β(IL -1β)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)含量的变化，旨在为该类患者提供更好的临床治疗方法提供参考依据，研究结果如下。

1 资料与方法

1.1 病例选择

根据 1999 年牙周病国际研讨会制定的分类标准，选取2013-07～2015-06间于我科就诊的慢性牙周炎患者共60 例。纳入患者均具备下列牙周病的典型症状：余留牙不少于20 颗；且有不同程度的牙龈红肿、充血、糜烂，探诊牙龈出血，或伴牙松动、牙周溢脓，每一象限至少有 2或 2 以上患牙牙周探诊深度 ≥ 4 mm； X线片显示牙槽骨有不同程度的吸收，但吸收不超过根长 1/ 2。排除系统疾病，若为女性，非经期与妊娠期； 1 个月内未使用抗生素； 3 个月内未使用过避孕药等性激素制剂； 3 个月内未使用过免疫制剂；患者签署知情同意书。

1.2 病例分组

共60 例，年龄35～64 岁，平均51 岁，随机分为实验组和对照组各30 例。 2 组性别、年龄等比较无统计学意义(P>0.05)，详见表 1。

组 别男女年龄/岁对照组191150.93±8.59实验组21950.70±8.72

1.3 方法

1.3.1 治疗方法 2 组患者均在进行口腔宣教及牙周基础治疗后，分别辅以生理盐水、玄菊解毒合剂漱口水(由金银花50 g、 野菊花50 g、 玄参50 g、 板蓝根50 g、 补骨脂25 g组成)，统一制成成品水煎液200 ml，2 瓶，每次饭后含漱20～25 ml，3 次/d，2 min/次含漱治疗，14 d为1 个疗程。

1.3.2 牙周临床指标观察 采用单盲法，于治疗前和治疗后14 d，由同一名医师使用牙周探针(Silver，Hu-Friedy)分别检查每位患者口腔内6 颗牙：11、31、16、46、26、36，每颗牙探诊6个位点，即近中颊面(MB)、颊面(B)、远中颊面(DB)、远中舌面(DL)、舌面(L)、近中舌面(ML)，每颗牙探诊最深的位点用作统计学分析。按照《口腔预防医学》检测标准[4]，评价治疗前后牙周状态相关指标：牙龈指数(GI)、牙周探诊深度(PD)和改良出血指数(mBI)。

1.3.3 龈沟液中的IL-1β和MMP-2采集与测定 每位患者选择取1颗受检牙(首选右下第一磨牙，若缺失则选右下第二磨牙或左下第一磨牙)，轻柔去除待测牙龈上大块结石，棉卷隔湿，轻吹牙面至干燥，将已称量的whatman 3#标准无菌滤纸条(2 mm×10 mm大小)插入取样牙颊侧近中、中央、远中3 个位点的牙周袋内，微感阻力，30 s后取出(若有血液和唾液污染，则弃置不用)。将同一患者的3 张滤纸条放入加有200 μl PBS缓冲液的EP管中，-70 ℃储存待测。采用酶联免疫吸附法(Elisa)对样本中IL-1β和MMP-2 浓度进行检测(CCC, USA)。采用明胶酶活性荧光测量法对MMP-2生物活性进行检测(Thermo Fisher, InvitrogenTM, EnzChek, D-12054 USA)，最终在2 h时用495 nm测量荧光值。

1.4 统计学方法

采用SPSS软件对治疗前后GI、 mBI进行秩和检验； PD、IL-1β和MMP-2指标自身前后进行配对t检验；不同干预组组间进行方差检验。

2 结 果

2.1 2 组病例治疗前后牙周临床指标比较

2 组患者治疗前牙周临床指标(GI、PD、mBI)对比，差异无统计学意义(P>0.05)。实验组、对照组受检牙齿治疗后的GI、mBI较治疗前均有明显下降(P<0.05)，实验组GI、mBI较对照组下降明显，有统计学意义(P<0.05)；而PD 2 组组内对比有统计学意义(P<0.05)，而治疗后组间对比无统计学意义(P>0.05)(表 2)。

Tab 2 Comparison of GI, mBI, PD between the 2 groups of pre- and post-treatment (n=30,

注：①：治疗后与治疗前对比，P<0.05； ②：治疗后，实验组与对照组相比，P<0.05

2.2 2 组病例治疗前后龈沟液中IL-1β和MMP-2变化

治疗前2 组病例的两项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。 14 d后，实验组、对照组受检牙治疗后的龈沟液中IL-1β和MMP-2的浓度较治疗前均有不同程度的下降，有统计学意义(P<0.05)；并且治疗后指标对比，实验组较对照组下降明显，其结果有统计学意义(P<0.05，图 1)。

2.3 2 组病例治疗前后龈沟液中MMP-2的酶活性变化

治疗前2 组病例的MMP-2活性定量值差异均无统计学意义(P>0.05)。 14 d后，实验组、对照组受检牙治疗后的龈沟液中MMP-2活性较治疗前均有不同程度的下降，且有统计学意义(P<0.05)；并且治疗后的MMP-2活性相比，实验组较对照组下降明显，其结果有统计学意义(P<0.01，图 2)。结果提示MMP-2酶活性与MMP-2的量直接相关，也提示Elisa结果的可信。

3 讨 论

牙周病是口腔临床常见疾病，更与全身健康或者疾病呈现双向关系，患牙周炎的患者可能处于患其他疾病的危险中，或者提示患者可能已经患某种系统性疾病；同时，严重的牙周炎不仅影响患者系统疾病的治疗与健康的恢复，而且大大降低其生活质量。可见牙周病的治疗至关重要，牙周健康与全身健康密不可分[1]。

通过牙周病发病机理的研究发现，机体的免疫反应在牙周病的发生发展中至关重要，炎症正是通过激活免疫系统而导致了牙槽骨的吸收[5]。相关的细胞因子以及基质金属蛋白酶在诱导牙周骨吸收中扮演着重要的角色[6]。IL-1β和MMP-2在龈沟液中含量的变化可与牙周炎症状呈正相关[7]。IL-1β主要通过刺激T、B淋巴细胞增殖、产生免疫应答、诱导宿主炎症反应、促进骨及软骨破坏吸收[8]，IL-1β是一种强大的炎性介质，其含量变化与反映牙周炎症程度的客观指标如GI、PD等有相关性[7,9-11]，被认为是介导牙周炎发生发展的重要因子。而MMP-2与牙周组织中胶原纤维的改建关系密切，在牙根吸收中发挥作用[12]，同时MMP-2可激活多种细胞因子如IL-1β等[13]，是牙周组织破坏过程的关键。

牙周炎根据其临床表现可将其归于中医牙宣病范畴。临证主要是以牙龈红肿，龈肉日渐萎缩，齿缝中常渗血渗脓，牙根宣露，甚则牙齿疏豁松动，终至缺失脱落为主要症状，是口腔常见病之一[2]。中医认为牙齿虽归肾所主，而上下牙床属阳明胃与大肠，牙齿与龈肉既需肾精之固济，亦需气血之濡养，其为病与肾胃关系至密。临证以实在阳明，胃火上炎多见[2]。本方中以川银花宣散上焦风热，清热解毒，为君药；野菊花与板蓝根共用，加强清热解毒作用，玄参滋阴解毒，盐补骨脂引药入肾经，补肾固齿。诸药合用，起清热解毒，消肿止痛之效[14]。

目前治疗牙周病的基本方法以牙周基础治疗为主，严重的牙周炎辅以西药、手术治疗等[1]，而长期使用抗生素等西药可能会产生耐药、菌群失调等问题。本研究按照中医理念，探求能配合基础治疗，有效缓解症状，促进恢复的治疗方法。玄菊解毒合剂漱口水中，金银花、野菊花、板蓝根清热解毒，不仅有抗菌性，且一定程度上抵抗内毒素作用[14-15]；玄参清热凉血、养阴生津、解毒散结[16]，补骨脂能显著抑制IL-1β等牙周膜细胞炎症因子的表达外[17]，还能调节骨代谢，加速骨愈合[18]。几味药相辅相成，可望辅助基本疗法，共同促进牙周组织恢复。

在课题组前期研究中发现[3]，玄菊解毒凝胶能有效减轻妊患娠期牙龈炎患者不适、口臭等症状，降低相应的牙周观察指标和炎性因子等临床指标。而本研究观察中，玄菊解毒合剂漱口水同样降低了临床指标GI、mBI，以及IL-1β和MMP-2分泌量；在进一步检测MMP-2生物活性时，其结果显示与MMP-2浓度变化相似。这些变化都有统计学意义(P<0.05)，证明了玄菊解毒合剂具有良好的临床疗效。虽然两组治疗前后PD变化明显，但PD治疗后组间对比变化不大，不具有统计学意义，这可能是由于牙周基础治疗配合生理盐水和玄菊解毒合剂漱口水缓解减轻了炎症症状，使得炎性因子分泌减少，肿胀的牙龈组织得以恢复，但牙周牙槽骨等支持组织的恢复是一个较长的过程，而本实验临床治疗观察时间短，缺乏阳性对照，下一步我们将延长观察时间，与阳性含漱剂如氯己定含漱剂等做对比，进一步测定其附着丧失(attachment loss, AL)、细胞因子等指标。

综上，在治疗慢性牙周炎上，玄菊解毒合剂漱口水可降低牙周临床指标，对降低炎性因子的含量也有一定积极作用，有一定临床应用前景。