冯华 代涛 陈铁 谭力力 潘淼 孙颖 张秀春

【摘要】目的 研究PCSK9拮抗剂干预心梗大鼠心肌细胞凋亡及炎症因子表达的机制研究。方法 选择我院2017年9月～2018年9月大鼠12例，其中对照组4例，缺血再灌注6 h、12 h各4例，观察其心肌细胞凋亡情况与炎症因子。 结果 再灌注6 h、12 h出现凋亡细胞所特有的DNA图谱，且灌注时间越长，梯状条带越明显，提示细胞凋亡程度加重。缺血再灌注12 h组在各项炎症情况上均高于对照组、缺血再灌注6 h，差异显著，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 对于PCSK9直接参与了心肌缺血再灌注损伤，随着再灌注时间的延长，表达将会出现明显增高，与心肌细胞凋亡之间变化存在一致性，且炎症因子也出现明显升高，值得应用。

【关键词】PCSK9拮抗剂;心梗大鼠;心肌细胞;炎症因子

【中图分类号】R969.4 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.9..02

细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的主要发病环节之一，而细胞凋亡的多少与缺血再灌注损伤程度存在一定联系[1]。人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）是生物信息方法与DNA微阵列技术中，发现的新的血液胆固醇代谢相关的基因。而目前有研究指出，PCSK9在胆固醇代谢中起到较为重要的作用，并参与细胞凋亡[2]。但PCSK9在心肌缺血再灌注中，是否存在表达，与心肌缺血之间是否存在联系，研究较少[3]。本文通过将心梗大鼠进行研究，观察PCSK9拮抗剂对心肌细胞凋亡与炎症抑制的表达意义，内容如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料

选择2017年9月～2018年9月我院培养的12例大鼠，其中对照组4例，缺血再灌注6 h、12 h各4例。

1.2  方法

均为健康雄性大鼠，按照清洁级动物分笼饲养，适应性喂养1周后，按照随机的原则进行分组。其中对照组为假手术组，只穿线不结扎，观察6 h。所有大鼠均自由饮水。

使用10%水合氯醛麻醉腹腔注射大鼠，并进行颈部气管插管，使用动物人工呼吸机进行机械辅助呼吸，在胸骨左侧1 cm做一纵向切口，打开胸腔，在左心耳根部下方2 mm处进针动脉圆锥旁出针，放松活结即可恢复血流形成再灌注。实验中观察心电图，出现ST段提高或深Q波形成并结扎线以下左心室壁，颜色变灰白，表明模型制备成功，结扎45 min后开放阻断钳，并仔细缝合切口，将腹腔内剩余气体抽尽，并观察大鼠自主呼吸情况，仔细缝合气管切口。手术结束后肌肉注射青霉素，积极预防感染，并适当保暖，喂养生理盐水。对照组仅开胸穿线，但不结扎冠状动脉。在实验终点吗，需要收集血液及缺血区心肌组织，心肌组织使用PBS漂洗，立即置液氮中冷冻保存，血液于室温静置2 h，3000 rpm离心20 min后吸取上层血清，于-20℃保存。

1.3  观察指标

观察缺血/再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡情况。

采用ELISA 法检测C 反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）炎症因子情况[4]。

1.4  统计学方法

均采取SPSS 19.0统计软件对本文数据进行分析计算，在计算计数资料的时候采取x2，选择n（%）进行表达，计算计量数据的时候采取t，选择（x±s）表达，其中当P<0.05的时候，数据为差异有统计学。

2 结 果

2.1  缺血/再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡情况

使用DNA试剂盒提取各试验组大鼠心肌中的DNA，經过琼脂糖凝胶电泳检测，其中再灌注6 h、12 h出现凋亡细胞所特有的DNA图谱，且灌注时间越长，梯状条带越明显，提示细胞凋亡程度加重。

2.2  不同大鼠之间炎症表达情况

缺血再灌注12 h组在各项炎症情况上均高于对照组、缺血再灌注6 h，差异显著，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨 论

目前我国心血管疾病发病率与死亡率逐年出现上升趋势，而缺血性心脏病主要是由于多种原因导致的冠脉血流量不足，难以满足心肌对能量所导致的心肌损害。目前主要采取冠脉搭桥或溶栓治疗，能够改善患者心肌血流供应，并保护缺血心肌，但术后并发症较多，使得效果并不理想[5]。而心肌缺血再灌注是多种作用下的病理作用，其作用机制目前并不清楚，但需要进一步明确心肌缺血再灌注损伤的机制，为临床治疗提供新理论。

本文通过将PCSK9拮抗剂进行研究，选择不同情况的大鼠，结果中：再灌注6 h、12 h出现凋亡细胞所特有的DNA图谱，且灌注时间越长，梯状条带越明显，提示细胞凋亡程度加重[6]。缺血再灌注12 h组在各项炎症情况上均高于对照组、缺血再灌注6 h，差异显著，差异有统计学意义（P<0.05）。细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤之间存在较为明显的关系，心肌缺血再灌注，且本文结果中再灌注时间越长的大鼠，且细胞凋亡情况越严重[7]。且有研究在人类心肌梗死的尸检中，也发现了急性心肌梗死的心肌细胞中存在明显的细胞凋亡，出现缺血再灌注损伤。其凋亡细胞主要分布在梗死灶收缩带周围，无梗死区域细胞其凋亡却较少[8]。但PCSK9也已经正式了，其能够促进肝LDLR的讲解，增加患者冠心病与心肌梗死的患病风险;与炎症之间也存在一定联系，使得多项炎症因子出现升高。

综上所述，对于PCSK9拮抗剂干预，心梗大鼠心肌细胞凋亡较为明显，炎症因子将会出现明显升高，且PCSK9 参与了心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程。

参考文献

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[2] 张   楠，高   静，刘   寅，等.PCSK9基因E670G位点多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病罹病风险及脂代谢的相关性研究[J].中华医学遗传学杂志，2017，34（5）：749-754.

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[8] 林润杰，魏锦坤，周丽红，等.冠心病患者血清循环PCSK9水平与脂代谢和颈动脉粥样硬化的关系分析[J].中国循证心血管医学杂志，2019，11（6）：684-687.