白国辉 曾凤娇 杨琳 陈靖 刘建国 田源

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)，一种革兰氏阴性厌氧球菌，与慢性牙周炎的发生密切相关。P.gingivalis通过其细胞表面的HA2基因与血红蛋白中血红素的卟啉环结合去获得其生存所必需的铁和卟啉, 同时P.gingivalis生存的厌氧环境也需要菌体表面的血红素维持[1]。张荃等[2]认为HA2基因是P.gingivalis引起牙周炎的相关因子之一，在DNA和RNA水平上证实了HA2基因与牙周状态有着紧密联系。白细胞介素-15(interleukin-15，IL-15)，通过诱导B1细胞的增殖分化，使其分化出分泌SIgA的浆细胞，达到抵御细菌对黏膜粘附从而防御病原入侵的作用。本课题组前期以HA2基因作为目的基因，IL-15作为免疫佐剂成功制备了牙周炎基因疫苗 pVAX1-HA2、pVAX1-HA2/IL-15。并通过RT-PCR在脂质体转染的真核细胞293T中证实，目的基因HA2在mRNA水平能够被正确表达。以及制备了相应的蛋白抗原，应用PCR、Western Blot、ELISA等技术证实目的基因在体外能够被正确表达。本次实验在前期基础上，通过牙周炎基因疫苗经鼻腔黏膜免疫SD大鼠后，检测唾液中相关的特异性抗体水平变化，观察该基因疫苗的免疫原性，探索牙周炎基因疫苗防治牙周病的可行性。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂

SD大鼠(第三军医大学野战外科研究所动物室，质检单位：重庆市实验动物质检中心，许可证号：SCXK (渝)2012-0005)。牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2、pVAX1-HA2/IL-15、 空载体pVAX1、 HA2抗原为课题组前期构建和保存； Goat anti-Mouse IgA Cross-Adsorbed( Thermo,美国)； 牛血清白蛋白(BSA)、 Secondary Antibody、 HRP(Amresco公司，美国)。戊巴比妥钠(上海哈灵生物科技有限公司)； 2%硝酸毛果芸香碱(山东正大福瑞达制药有限公司)。

1.2 主要试剂配制

Elisa相关试剂配置详见参考文献[3]。……