陆 丹，郝英婵

湖北省妇幼保健院检验科，湖北武汉 430000

儿科重症监护室(PICU)患儿病情危重，容易发生侵袭性真菌病(IFD)，PICU患儿发病率约占医院获得性感染的8%～15%[1]。IFD是导致PICU患儿死亡的重要病因之一。目前，IFD的诊断金标准是基于真菌入侵的组织病理学证据[2]。然而，在PICU环境下，因为肺活检经常存在禁忌证，即凝血功能障碍或急性呼吸窘迫综合征，且创伤性很大；重症患儿呼吸道培养中真菌的分离耗时长，而且PICU医生必须区分定植菌和IFD，才能作为早期诊断的指标；此外，影像学研究仅提示真菌感染[3]。因此，非培养为基础的方法，如生物标志物和分子工具PCR，已被评价为提高IFD早期和特异性诊断的方法。本研究主要通过分析PICU疑似IFD患儿的炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10水平，以及半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)和(1,3)-β-D葡聚糖检测(G试验)的结果，探讨炎症因子检测、GM试验和G试验等实验室检查对PICU患儿IFD的早期诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月至2018年12月在湖北省妇幼保健院PICU就诊治疗且有IFD高危因素的患儿250例，根据IFD诊断标准将患儿分为确诊IFD组、拟诊IFD组和非IFD组。其中确诊IFD组患儿70例，男44例、女26例，年龄1月至13岁、平均年龄(5.61±2.87)岁；拟诊IFD组患儿68例，男41例、女27例，年龄1月至11岁、平均年龄(5.24±2.16)岁；非IFD组患儿112例，男71例、女41例，年龄1月至14岁、平均年龄(5.99±2.49)岁。3组患儿性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会同意，患儿家属均知情同意。

1.2方法

1.2.1炎症因子检测 采集3组患儿空腹血标本，离心取血清检测炎症因子表达水平，其中包括IL-10、IL-6、IL-8和IL-17，使用酶联免疫试剂盒(上海通蔚科技有限公司)进行定量检测，严格按照说明书进行操作。

1.2.2GM试验和G试验 采集患儿抗真菌治疗前的空腹外周静脉血3 mL和临床医师按纤维支气管镜常规操作取回收肺泡灌洗液 3～5 mL，离心留取血清和上清液待测。采用G试验检测试剂盒进行检测，严格按照说明书进行操作，检测值>151.5 pg/mL判为阳性；采用酶联免疫吸附法GM试剂盒进行检测，使用酶标仪检测待测标本中半乳甘露聚糖抗原水平，GM试验结果≥0.5 μg/L为阳性。

2 结 果

2.13组患儿血清中炎症因子水平比较 3组患儿血清IL-6、IL-8、IL-10和IL-17水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。确诊IFD组IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表达水平高于拟诊IFD组和非IFD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。拟诊IFD组IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表达水平明显高于非IFD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.23组患儿肺泡灌洗液中炎症因子水平比较 确诊IFD组患儿肺泡灌洗液中IL-6、IL-8表达水平明显高于拟诊IFD组和非IFD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。拟诊组IFD组患儿肺泡灌洗液中IL-6、IL-8水平高于非IFD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。3组IL-10和IL-17表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 3组患儿血清中炎症因子表达水平比较

表2 3组患儿肺泡灌洗液中炎症因子表达水平比较

2.33组患儿G试验和GM试验结果比较 250例患儿中，G试验检测阳性患儿119例，阴性患儿131例，阳性率47.60%；GM试验检测阳性患儿101例，阴性患儿149例，阳性率40.40%，见表3。以微生物痰真菌培养或病理组织学检测结果为金标准，G试验和GM试验诊断IFD的灵敏度等结果见表4。GM试验联合G试验检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于G试验和GM试验单独检测，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表3 3组患儿G试验和GM试验结果(n)

表4 G试验、GM试验单独及联合检测对IFD的诊断效能分析

3 讨 论

IFD是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长、繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎性反应的病理改变及病理生理过程，其中最常见的病原菌是以念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉菌为主的丝状真菌，分别占90.4%和4.8%[4]。PICU患儿病情危重，生理屏障完整性受到破坏，身体多器官功能同时受累，免疫功能明显下降，因此患儿极易感染真菌[5]。目前临床检验中检测真菌的金标准是微生物痰培养或组织病理学检查，然而，痰培养耗时长，检测结果一般需要3 d；影像学检查通常在感染3周后会表现出病变；组织病理学检查创伤性大，有些患儿病情危重难以取材，造成了患儿IFD早期诊断困难，所以选择灵敏度和特异度高的生物标志物在肺真菌感染的早期诊断、预后评估和反应监测中发挥重要作用[6]。

炎症因子在近两年被认为是IFD的早期诊断标志物，在机体受到感染后机体免疫系统发挥作用产生炎症因子。在肺部感染中，起主要作用的炎症因子有IL-6、IL-8、IL-10和IL-17等[7]。炎症因子刺激肺内多种细胞因子介导的炎症细胞迁移到肺间质和肺泡，进一步释放大量炎症递质和细胞因子，进而加重炎性反应，因此，通过分析炎症因子可以早期预测和诊断肺部疾病[8]，然而在IFD中炎症因子的作用机制在国内鲜见报道。(1,3)-β-D葡聚糖存在于真菌的细胞壁上，在IFD的过程中，(1,3)-β-D葡聚糖可从细胞壁中释放入血液或其他液体中，通过检测血液或肺泡灌洗液中(1,3)-β-D葡聚糖可反映早期IFD情况[9]。半乳甘露聚糖是早期存在曲霉菌细胞壁表面的多糖，在曲霉菌侵袭性感染的早期阶段释放到血液或其他液体中，通过GM试验可早期诊断侵袭性曲霉菌感染[10-11]。DABAS等[12]通过ROC曲线分析得出，半乳甘聚糖是预测病死率的一个较好指标，其最佳截断值为1.24 μg/L。这些结果表明,半乳甘露聚糖可以预测和评估患儿对治疗的反应和IFD患儿生存治疗效果，在后续研究中笔者将会收集患儿病例，分析半乳甘露聚糖对患儿治疗效果的预测，以及血清半乳甘露聚糖水平与短期和长期生存之间的相关性。

本文对具有IFD高危因素的患儿进行G试验和GM试验，结果显示G试验对IFD的诊断灵敏度为87.07%，特异度为86.57%，阳性预测值为84.87%，阴性预测值为88.55%；GM试验的诊断灵敏度为83.84%，特异度为88.08%，阳性预测值为82.18%，阴性预测值为89.26%，G试验和GM试验对于患儿IFD诊断效果显著，该结果与现有报道一致[13]。GM试验和G试验联合检测的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显升高，与单独检测相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。对3组患儿血清和肺泡灌洗液中炎症因子进行检测分析，结果表明确诊IFD组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表达水平高于拟诊IFD组和非IFD组(P<0.05)，肺泡灌洗液中炎症因子IL-6和IL-8表达水平高于拟诊IFD组和非IFD组(P<0.05)，而肺泡灌洗液中IL-10和IL-17表达水平3组间差异无统计学意义(P>0.05)。因此，血清IL-10和IL-17，以及肺泡灌洗液中炎症因子IL-6和IL-8对IFD的诊断具有临床价值。

综上所述，对PICU具有IFD高危因素的患儿进行炎症因子检测，对于评估病情的严重程度有指导作用，动态监测炎症因子表达水平有助于判断IFD治疗与预后效果[14]。G试验和GM试验联合检测，可明显提高对IFD的诊断灵敏度和特异度，为IFD早期诊断和治疗提供一定的依据，阻止病情恶化，降低PICU感染患儿的病死率。