何璋海，沈溪明

（中山大学孙逸仙纪念医院病理科，广东 广州）

1 材料

1.1 材料

收集我院日常的冰冻切片病例，如乳腺、卵巢、甲状腺、淋巴结等冰冻活检组织。

1.2 仪器 CM 1950 冰冻切片机（德国徕卡公司）

NQ100S 全自动冰冻染色机（广州耐确医疗设备公司）

1.3 试剂

冰醋酸95%酒精（1:99）混合固定液、改良Harris’苏木素、0.5%盐酸酒精、饱和碳酸锂溶液、0.5%水溶性伊红液、80%酒精、95%酒精、无水酒精、苯酚二甲苯（1:3）混合液、二甲苯、中性树胶。

1.4 试剂配制

冰醋酸95%酒精混合固定液：将5mL 冰醋酸加入到495mL95%酒精中，充分混匀。

改良Harris’苏木素：将苏木精5g 溶于50mL 无水乙醇，硫酸铝钾100g 溶于1000mL 蒸馏水中，煮沸溶解，然后将两液均匀混合至染液呈淡红色，继续加热煮沸后取出，待30s 后缓慢加入氧化汞，待染液呈深紫色立即置入冰水中，待冷却至室温后过滤[2]。临用前每80mL 苏木素添加3mL 冰醋酸，充分混匀。

0.5 %水溶性伊红液：水溶性伊红粉末 2.5g，将其溶于500mL蒸馏水，充分溶解，过滤。临用前 每80mL 水溶性伊红液滴加50微升冰醋酸，充分混匀。

苯酚二甲苯混合液：将100mL 苯酚加入到400mL 二甲苯中，充分混匀。临用前加80mL 至冰冻染色机的试剂缸中。

2 方法

2.1 冰冻组织切片

切片厚3-4μm，裱贴在载玻片中央，于载玻片磨砂面正确编号，放入冰冻染色机的片篮中，启动染色程序，即可上机染色。

2.2 全自动冰冻切片HE 染色程序

程序染色完成后，手动取出切片，在抽风橱内中性树胶封片。

3 结果

冰冻切片HE 染色结果显示细胞核呈蓝色，细胞浆、纤维、红细胞呈现不同程度的红色，颜色鲜艳，对比清晰。

图1 卵巢低分化腺癌（冰冻切片HE 染色） 低倍镜下图

表1 全自动冰冻切片HE 染色程序

图2 乳腺导管原位癌（冰冻切片HE 染色） 低倍镜下图

图3 乳腺浸润性癌（冰冻切片HE 染色） 低倍镜下图

图4 NQ100S 全自动冰冻染色机

4 讨论

NQ100S 是广州耐确医疗公司自主研发的一款全自动冰冻染色机，设备有软、硬件2 个部分组成，该型号为单染色单元，每次最大染片量为4 片，可扩充为双染色单元，最大染片量为8 片，可无限循环操作，该设备属于浸染式染色平台，具备成本相对低级试剂开放等特点[3]。该设备单染色周期为5-8min,可满足冰冻诊断快速染色的要求（单份活检冰冻切片时间≤30min）,机身自带液面探测功能，每缸试剂的使用时间和次数都有累计记录并自动监控，及时提醒操作者更换染色试剂。染色缸为转盘设计，每缸带独立盖子，避免试剂挥发和防止污染环境，苏木素试剂缸附带加热功能，能弥补冬天染片上色慢的不足。触摸屏的设计可以实时显示染色过程和常见故障，使操作人员对试剂的使用及每天工作流程进行监控[4]，还可以通过预设染色程序以及参数设定来降低因组织不同而带来的染色差异，另外还附设一键启动和报警功能，染色完成后会自动报警，提示染色结束，使操作更为人性化和简便。

结合自身工作实践，对NQ100S 全自动冰冻染色机的使用和保养总结如下：（1）建立规范的仪器使用制度，并制定SOP 文件，专人负责，培训上岗；（2）根据医院手术室送检的标本类型和科室实际情况制定3-5 种染色程序，从实际工作经验中摸索出最适合本科室冰冻切片HE 染色的最佳程序；（3）每天上机前要及时观察试剂的使用量，提前准备染液；（4）因我们科室是使用改良Harris’苏木素，每天染色前必须观察苏木素有无氧化膜形成，及时过滤，避免造成染片污染[5]；（5）每天冰冻切片工作前至少提前30min进行仪器自检运行，确保机器的清洗管道保持畅通以及加热装置正常运作；（6）定期保养，每周安排专人清洁全自动冰冻染色机，发现问题及时上报，请仪器工程师来协助解决问题，每半年要进行预防性检修工作，延长设备的使用寿命；（7）制备机器的使用记录表，包括试剂的更换用量、更换时间、操作者以及发现的问题和解决方案，都应能在记录表上体现，做好交接班的手续。

全自动冰冻染色机因其高效、便捷、染色质量稳定等优势开始逐渐应用于国内各大医院病理科和实验室，比起传统的人工处理因操作繁琐、费时费力等带来的不良影响，现在可以通过智能化的编程设计和程序化操作，从而可以使操作者在进行切片、贴片的同时，利用全自动设备来完成染色程序，大大降低了操作者的工作强度，解放生产力，更能高效地减少人为染色的随意性，进一步确保染片质量的均一性和稳定性。

总之， 耐确医疗公司生产的NQ100S 全自动冰冻染色机作为我国自主研发的冰冻染色设备，利用计算机和触摸屏的优势来整合染色模块，进而能更好的帮助病理技师以高效、人性化的操作来弥补传统手工染片的不足，使冰冻病理切片水平由传统的经验控制转变为科学、智能化的质量控制，更加有利于对试剂使用和冰冻染色的流程进行监控，值得推广使用。