谢玲玲，李仁杰

山丹颗粒是临床经验方，由山楂、丹参、川芎等中药组成，其功效为活血散瘀、行气止痛，临床用于治疗胸痹心痛。临床人拟用量为生药45 g/d[生药0.64 g/(kg·d)，按70 kg体重计算]。本研究观察山丹颗粒对垂体后叶素(Pit)致大鼠急性心肌缺血的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 无特定病原体(SPF)级SD大鼠60只，雌雄各半，体重180～220 g；购于广东省医学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(粤)2014-136。

1.2 药物 山丹颗粒(规格：每袋5 g，1 g颗粒相当于4.5 g生药，深圳市龙华区人民医院提供，批号：20170421)，口服，每次1袋，每日2次。硝酸异山梨酯片(规格：每片5 mg，北京恒生药业有限公司，国药准字：H11021331，批号：170803)，口服，每日1～2片，每日2次或3次。

1.3 试剂 盐酸异丙肾上腺素(上海禾丰制药有限公司，国药准字：H31021344，批号：41170612)；戊巴比妥钠(SIGMA，批号：127k1005)；肝素注射液(南京新百药业有限公司，国药准字：H32025851，批号：170316)；氯化钠注射液(四川科伦药业股份有限公司， 国药准字：H20056626，批号：1509130223)；大鼠肌钙蛋白T(cTnT)检测试剂盒(上海康朗生物科技有限公司)。

1.4 仪器 生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司生产；多导生理记录仪，澳大利亚AD公司生产；BY-R4000型低速医用离心机(北京白洋医疗器械有限公司生产)；电热恒温培养箱(苏州澳尔利烘箱电热设备制造有限公司生产)；ReadMax 1900型光吸收型全波长酶标仪(上海闪谱生物科技公司生产)；Nikon130285型光电显微镜。

1.5 方法 将60只SPF级SD大鼠随机分为6组，分别为空白对照组、模型对照组、山丹颗粒低剂量组(生药4.05g/kg)、山丹颗粒中剂量组(生药8.10 g/kg)、山丹颗粒高剂量组(生药16.20 g/kg)、硝酸异山梨酯片组(2.70 mg/kg)，每组10只。灌胃给药，空白对照组、模型对照组给予等量蒸馏水，每日1次，连续给药14 d，末次给药60 min后，戊巴比妥钠(55 mg/kg)腹腔注射麻醉后，分离颈总动脉，近头端处结扎，左心室插管测心室内压，分离右侧股动脉，近足端结扎，测量动脉压，Ⅱ导心电图，以上连接于多道生理记录仪。尾静脉注射垂体后叶素注射液(0.4 U/kg)[1-3]造模，空白对照组注射等体积生理盐水，描记造模前及造模后15 s、15 min、30 min的心电图、股动脉压及左心室内压，监测动脉收缩压(SAP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)。描记结束后大鼠腹主动脉采血，测cTnT。采血后取心脏，用福尔马林溶液固定，取左心室，用于苏木素-伊红(HE)染色，观察心肌组织结构的变化。

2 结 果

2.1 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较，山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段均降低(P<0.05)。山丹颗粒低剂量组与山丹颗粒中剂量组虽然呈剂量依赖性降低ST段，但差异无统计学意义。详见表1。

表1 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影响(±s) 单位：mV

①与空白对照组比较，P<0.01；与模型对照组比较，②P<0.05。

2.2 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠注射Pit后15 min、30 min T波显著降低(P<0.05)。与模型对照组比较，山丹颗粒中剂量组大鼠注射Pit后30 min T波显著升高(P<0.05)；山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit后15 min、30 min T波显著升高(P<0.05)。详见表2。

表2 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影响(±s) 单位：mV

①与空白对照组比较，P<0.05；与模型对照组比较，②P<0.05。

2.3 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血动脉收缩压的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠注射Pit后15 s、15 min动脉收缩压均升高(P<0.05)。山丹颗粒各剂量组与模型对照组比较各时间点差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血动脉收缩压的影响(±s) 单位：mmHg

注：1 mmHg=0.133 kPa；①与空白对照组比较，P<0.05。

2.4 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血左室收缩压的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠注射Pit后15 s、15 min左室收缩压显著升高(P<0.05)。与模型对照组比较，山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit后15 min左室收缩压显著降低(P<0.05)。详见表4。

表4 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血左室收缩压的影响(±s) 单位：mmHg

①与空白对照组比较，P<0.05；与模型对照组比较，②P<0.05。

2.5 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒张期末压的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠注射Pit后15s、15min，左室舒张期末压均显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较，山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit后15 s、15 min左室舒张期末压显著降低(P<0.05)；山丹颗粒中剂量组大鼠注射Pit 15 min左室舒张期末压降低(P<0.05)。详见表5。

表5 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒张期末压的影响(±s) 单位：mmHg

①与空白对照组比较，P<0.01；与模型对照组比较，②P<0.05。

2.6 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血血清cTnT的影响 与空白对照组比较，模型对照组血清cTnT显著升高(P<0.01)；与模型对照组比较，山丹颗粒高剂量组大鼠血清cTnT显著降低(P<0.05)。详见表6。

表6 山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血 血清cTnT的影响(±s) 单位：μg/L

①与空白对照组比较，P<0.01；与模型对照组比较，②P<0.05。

2.7 大鼠左心室心肌组织HE染色 由HE染色可见，空白对照组大鼠心肌无病变，细胞排列紧密、层次清晰，细胞核圆形或椭圆形，核仁清晰，心肌细胞胞浆、核染色均匀。模型对照组大鼠心肌左心室片状透壁坏死，多处局灶性损害，肌纤维肿胀和断裂，心肌细胞溶解消失，呈片状淋巴细胞浸润。各给药组心肌细胞出现局灶性的间质反应，肌纤维断裂以及水肿，部分心肌细胞溶解消失，但与模型对照组病变程度相比均有所减轻。详见图1。

图1 各组大鼠左心室心肌组织HE染色图(×200倍)

(A为空白对照组；B为模型对照组；C为山丹颗粒低剂量组；
D为山丹颗粒中剂量组；E为山丹颗粒高剂量组；F为硝酸异山梨酯组)

3 讨 论

心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，心脏的供氧失衡，心肌能量代谢失常，不能支持心脏正常功能的病理状态。Pit作用于加压素受体，可引起冠状动脉痉挛，心肌供血不足和心肌损伤，收缩全身小血管使心脏负荷加重，导致心肌缺血[4-6]。本研究中山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit 15 min后左室收缩压显著降低，可以降低心肌耗氧量。山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit 15 s、 15 min后左室舒张期末压显著降低，说明山丹颗粒可以降低心脏后负荷，进而降低心肌耗氧量，缓解由Pit造成的心肌缺血、缺氧。

ST段反映心室各部处于去极化状态，故无电位差。正常接近于等电位线。当某部位的心肌出现缺血时，心室在除极后仍存在电位差，表现为ST段发生偏移[7-8]。山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit 15min、30 min后ST段升高幅度显著降低。T波位于ST段之后，是心室复极所产生的，从基线开始缓慢上升后较快下降。T波方向和QRS波群的主波方向一致。T波低平或倒置，常见于心肌缺血[9-10]。山丹颗粒中剂量组大鼠注射Pit 后30 min T波高度显著升高，山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit 后15 min和30 min T波高度显著升高。从改变ST段升高幅度和T波降低幅度可以得出山丹颗粒可减轻Pit造成的心肌缺血程度。肌钙蛋白(Tn)是肌肉组织收缩的调节蛋白，cTnT是心肌细胞特有的抗原，当心肌细胞受到损伤时cTnT从心肌纤维上降解下来[11]。血清中cTnT升高表明心肌细胞受损，其特异性与敏感性均高于常用的心肌酶谱[12]。山丹颗粒高剂量组大鼠注射Pit后血清cTnT水平显著降低，提示山丹颗粒具有减轻由Pit诱发心肌缺血而引起的心肌细胞损伤的作用。

山丹颗粒对Pit致大鼠急性心肌缺血模型具有保护作用，以上药效学结果为山丹颗粒在临床治疗胸痹心痛提供了试验依据。