李小敏 李娜

【摘要】 目的：探討血小板反应蛋白1（TSP-1）和转化生长因子β1（TGF-β1）在妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）胎盘组织中的意义及与胎儿缺氧的关系。方法：选取本院2019年1-8月的40例GDM孕妇作为观察组，并选取同期40例正常孕妇作为对照组。所有孕妇分娩时留取胎盘组织。比较两组TSP-1和TGF-β1表达阳性率;比较观察组TSP-1、TGF-β1表达阳性与阴性者的血糖指标;分析TSP-1和TGF-β1表达与GDM孕妇血糖指标的相关性，比较观察组TSP-1和TGF-β1表达阳性与阴性者的胎儿缺氧发生率。结果：观察组TSP-1与TGF-β1表达阳性率均高于对照组（P<0.05）。观察组TSP-1与TGF-β1阳性者的空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均高于阴性者（P<0.05）。TSP-1与TGF-β1表达与空腹血糖、糖化血红蛋白、HOMA-IR均呈正相关（P<0.05）。观察组TSP-1与TGF-β1表达阳性者的胎儿缺氧发生率均高于阴性者（P<0.05）。结论：GDM孕妇胎盘组织中TSP-1和TGF-β1表达阳性率较高，TSP-1和TGF-β1表达与空腹血糖、糖化血红蛋白及HOMA-IR均呈正相关，TSP-1和TGF-β1表达阳性会增加胎儿缺氧风险。

【关键词】 妊娠期糖尿病 血小板反应蛋白1 转化生长因子β1

[Abstract] Objective： To investigate the significance of thrombospondins-1 （TSP-1） and transforming growth factor β1 （TGF-β1） in the placental tissues of gestational diabetes mellitus （GDM） and their relationship with fetal hypoxia. Method： A total of 40 pregnant women with GDM in our hospital from January to August 2019 were selected as the observation group， and 40 normal pregnant women in the same period were selected as the control group. Placental tissue was collected from all pregnant women at the time of delivery. The positive expression rates of TSP-1 and TGF-β1 in the two groups were compared. The blood glucose indexes of the patients with positive and negative expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were compared. To analyze the correlation between the expression of TSP-1 and TGF-β1 and the blood glucose index in pregnant women with GDM， and the incidence of fetal hypoxia in the patients with positive and negative expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were compared. Result： The positive rate of expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were higher than those in the control group （P<0.05）. Fasting glucose， glycosylated hemoglobin and insulin resistance index （HOMA-IR） of patients with positive expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were higher than those with negative （P<0.05）. The expression of TSP-1 and TGF-β1 was positively correlated with fasting blood glucose， glycosylated hemoglobin and HOMA-IR （P<0.05）. The incidence of fetal hypoxia in the patients with positive expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group was higher than negative （P<0.05）. Conclusion： The positive rate of expression of TSP-1 and TGF-β1 in the placental tissues of pregnant women with GDM was higher， the expression of TSP-1 and TGF-β1 was positively correlated with fasting blood glucose， glycosylated hemoglobin and HOMA-IR， and positive expression of TSP-1 and TGF-β1 increased the risk of fetal hypoxia.[Key words] Gestational diabetes mellitus TSP-1 TGF-β1

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）为孕期常见并发症，发病率7%～10%，此病不僅增加孕妇产后糖尿病风险，还会影响妊娠结局。GDM发病机制虽仍不明确，但有研究发现，多功能糖蛋白血小板反应蛋白1（TSP-1）参与机体免疫、炎症反应等，可通过对炎症因子水平的影响增加糖尿病风险[1]。转化生长因子β1（TGF-β1）为多功能细胞因子，参与糖尿病、代谢综合征等疾病的发生。由于GDM与糖尿病发病机制存在相似性，故有专家推测TSP-1和TGF-β1表达与GDM之间也存在相关性，但相关研究目前较为缺乏。本研究以40例GDM孕妇为例，分析GDM产妇胎盘组织中TSP-1和TGF-β1表达及与胎儿缺氧的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2019年1-8月GDM孕妇40例作为观察组，并选取同期本院40例正常孕妇作为对照组。纳入标准：符合GDM诊断标准;年龄>18岁;孕周24～28周;单胎妊娠;临床资料完善。排除标准：有烟酒嗜好者;伴妊娠期高血压等其他妊娠期并发症者;伴全身急慢性感染、多囊卵巢综合征者;伴心血管、肾脏、免疫与血液系统疾病者;不明原因的阴道流血者;前置胎盘、胎盘早剥及先兆早产者;妊娠期服用过除维生素与钙剂外的其他治疗药物者。所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 方法 所有患者分娩时均采取剖宫产，留取母体面近脐根部处胎盘组织（约1 cm3大小），4%甲醛溶液中室温固定、脱水、石蜡包埋，4 μm厚连续切片，常温保存。采用免疫组织化学SP法检检测胎盘组织中TSP-1与TGF-β1表达情况。载玻片用多聚赖氨酸进行附膜，将胎盘组织切片附于载玻片上，60 ℃下烘烤过夜。脱蜡：将组织切片依序浸入二甲苯、浓度100%、95%、90%、85%、75%的乙醇溶液中各5 min分别2遍，磷酸盐缓冲（PBS）液冲洗2遍。用1%甲醇双氧水洗10 min，蒸馏水洗1遍，PBS液冲洗3遍，每遍5 min。将组织切片放入柠檬酸盐缓冲液中，微波辐射10 min，待降至室温后用PBS液冲洗3遍，每遍5 min。切片上滴加正常山羊血清封闭液，室温下孵育20 min，甩去多余液体。滴加一抗（Thrombospondin-1、兔原TGF-β1多克隆抗体），4 ℃下过夜，PBS液冲洗3遍，每遍5 min。滴加生物素化二抗，37℃静放20 min， PBS液冲洗3遍，每遍5 min。在400倍视野下随机观察5个视野（每个视野计数100个细胞），依据细胞染色强度和阳性细胞占比进行判定。细胞染色强度评分：0分：无着色，1分：浅黄色;2分：棕黄色;3分：棕褐色。阳性细胞占比：0分：无阳性细胞，1分：阳性细胞占比;2分：阳性细胞占比25%～50%;3分：阳性细胞占比50%～75%;4分：阳性细胞占比>75%。免疫组织化学判定标准：计算细胞染色强度评分与阳性细胞占比评分的乘积，10～12分：强阳性（+++）;6～9分：阳性（++）;3～5分：弱阳性（+）;0～2分：阴性（-）。

1.3 观察指标与判定标准 （1）比较两组TSP-1和TGF-β1表达阳性率。表达阳性=强阳性+阳性+弱阳性。（2）比较观察组中TSP-1、TGF-β1表达阳性与阴性者的血糖指标。包括空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及空腹胰岛素。采集两组空腹静脉血约3 mL，置于抗凝管中，用胶体金法检测空腹血糖与糖化血红蛋白，采用酶联免疫吸附法检测空腹胰岛素。HOMA-IR=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5。（3）分析TSP-1和TGF-β1表达与GDM孕妇血糖指标的相关性。（4）观察组妊娠结局。观察组早产与新生儿窒息情况，比较观察组中TSP-1、TGF-β1表达阳性与阴性者的胎儿缺氧发生率。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，等级资料比较采用秩和检验，相关性分析采用Spearman秩相关系数，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 观察组年龄23～38岁，平均（29.04±3.19）岁;孕周24～28周，平均（25.97±1.57）周;孕期增重7～20 kg，平均（12.79±2.38）kg。对照组年龄23～38岁，平均（28.85±3.25）岁;孕周24～28周，平均（26.21±1.65）周;孕期增重6～21 kg，平均（13.22±2.51）kg。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组TSP-1表达阳性率比较 观察组TSP-1表达阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 两组TGF-β1表达阳性率比较 观察组TGF-β1表达阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 观察组TSP-1、TGF-β1表达阳性与阴性者血糖指标比较 TSP-1与TGF-β1表达阳性者的空腹血糖、糖化血红蛋白及HOMA-IR均高于阴性者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3、4。

2.5 TSP-1和TGF-β1表达与GDM孕妇血糖指标的相关性 TSP-1表达与空腹血糖、糖化血红蛋白及HOMA-IR均呈明显正相关（r=0.388、0.473、0.450，P=0.013、0.002、0.003）。TGF-β1表达与空腹血糖、糖化血红蛋白及HOMA-IR均呈明显正相关（r=0.436、0.428、0.451，P=0.005、0.006、0.004）。

2.6 观察组中不良妊娠结局比较 观察组中共出现4例新生儿窒息与8例早产。TSP-1表达阳性者胎儿缺氧发生率为44.00%（11/25）高于阴性者的6.67%（1/15），差异有统计学意义（字2=6.222，P=0.013）。TGF-β1表达阳性者胎儿缺氧发生率为50.00%（10/20）高于阴性者的10.00%（2/20），差异有统计学意义（字2=7.619，P=0.006）。

3 讨论

专家认为，积极探索GDM发病机制，并对GDM进行早期干预是减少并发症、改善妊娠结局的关键[2]。本研究发现，与健康孕婦相比，GDM孕妇的胎盘组织TSP-1与TGF-β1表达阳性率均相对更高，GDM孕妇的TSP-1与TGF-β1表达阳性与空腹血糖、糖化血红蛋白、HOMA-IR均呈明显正相关，提示胎盘组织TSP-1与TGF-β1表达与GDM之间存在密切关系。

TSP-1为多功能糖蛋白，是机体的生理激活物之一，由内皮与血小板衍生，在肾脏、心脏中均可表达，具有促血栓形成与抗血管生成作用，参与激活血管内皮细胞，造成氧代谢产物与血管活性物质增加，纤维蛋白原沉积等[3-4]。动物实验发现，TSP-1可从血小板α颗粒中被分离，并在激活后释放出来，介导血小板活化与黏附富集，诱导血小板性血栓形成，并加重局部氧化应激损伤，通过加重胰岛β细胞缺血再灌注损伤的途径影响GDM的血糖指标进一步异常[5-6]。有研究发现，TSP-1可促进单核细胞或巨噬细胞对胰岛β细胞的浸润，从而增加机体内分泌功能紊乱的风险，这是TSP-1表达阳性孕妇的空腹血糖与糖化血红蛋白高于阴性孕妇的另一个主要原因[7]。另外，TSP-1还可诱导下游炎性细胞因子富集，加剧糖耐量异常。王云枫等[8]研究则认为，TSP-1还可通过对血管内皮生长因子的影响干预机体血糖代谢与肝脏糖原输出而造成血糖指标的进一步异常。

TGF-β1为多肽信号分子，可被高糖水平激活，通过对胰岛素基因转录与胰岛β细胞功能的调控作用参与血糖水平调控，故胎盘组织的TGF-β1表达会造成GDM孕妇血糖指标的异常[9]。另外，GDM的发生与慢性炎症有一定关联，TGF-β1可通过对NF-κB的调节，上调炎性细胞因子水平，影响胰岛素敏感细胞的胰岛素受体底物磷酸化，加重胰岛素抵抗发生[10-12]。故TGF-β1的高表达会造成体内胰岛素受体敏感性下降，加重胰岛素抵抗，造成血糖指标的进一步改变，故GDM孕妇中TGF-β1阳性表达的空腹血糖、糖化血红蛋白与HOMA-IR均高于TGF-β1阴性（P<0.05）。专家发现，高糖状态会诱导系膜细胞TGF-β1的激活，增加系膜细胞合成TSP-1，促使TGF-β1的自分泌活化，故两者之间具有互相影响的作用，这一结果提示，GDM孕妇中TGF-β1表达可受到TSP-1的影响，而造成血糖指标的差异[13]。

有研究认为，TSP-1的激活可在一定程度上对成肌纤维细胞与炎性细胞活性造成间接影响，改变多形核细胞的激活和趋化作用，从而对血管内皮细胞造成影响，故胎盘组织中TSP-1的高表达会增加新生血管形成受到的抑制作用，造成胎盘组织缺血与缺氧，这是TSP-1阳性孕妇早产与新生儿窒息率高于TSP-1阴性孕妇的主要原因[14-16]。动物实验发现，TGF-β1可通过受体信号传递参与细胞增殖和分化的调节、炎性反应与组织修复及胚胎发育等过程，TGF-β1高表达是造成胎儿缺氧的主要影响因素之一[17-18]。TGF-β1在胎盘组织的高表达可通过对滋养细胞功能的影响加重胎盘血管内皮损伤，造成胎盘缺血、缺氧，诱发胎盘功能障碍，这是TGF-β1表达阳性孕妇的胎儿缺氧发生率高于阴性孕妇的主要原因。陈海霞等[19]研究认为，TSP-1与TGF-β1还可通过对内皮细胞的作用对胎盘灌注造成影响，从而增加胎儿缺氧风险。

综上所述，GDM孕妇胎盘组织中TSP-1和TGF-β1表达可对血糖指标造成明显影响，并通过对血管内皮细胞与的影响增加胎儿缺氧风险，不利于妊娠结局。胎盘组织中TSP-1和TGF-β1表达可为GDM治疗提供新靶点，应引起重视。

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（收稿日期：2019-09-20） （本文编辑：田婧）