李歆，渠成名，韩英伦,2，刘欣,2，李庆伟,2

研究报告

七鳃鳗分子鉴定、重组表达及免疫学研究

李歆1，渠成名1，韩英伦1,2，刘欣1,2，李庆伟1,2

1. 辽宁师范大学生命科学学院，七鳃鳗研究中心，大连 116029 2. 大连工业大学，海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心，大连 116034

高等脊椎动物的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(SH2 domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2)由基因编码，催化酪氨酸残基去磷酸化，与其他能催化酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶共同调节机体内多种信号通路的信号传导。以往研究表明，SHP2在高等脊椎动物T细胞和B细胞的激活与信号转导过程中起着重要作用。为了研究无颌类脊椎动物日本七鳃鳗()中与SHP2同源的分子——在免疫应答反应中的作用，本研究通过PCR 扩增获取其开放阅读框序列，并构建到原核表达载体 pET-32a中，成功在大肠杆菌中实现重组蛋白表达并制备了其兔源多克隆抗体。用混合菌免疫刺激日本七鳃鳗后，通过实时荧光定量PCR和免疫印迹方法检测了在日本七鳃鳗免疫相关组织中mRNA和蛋白水平表达谱。结果显示，混合菌免疫刺激后，mRNA和蛋白表达在外周血白细胞和髓样小体中无显著变化，而在鳃组织中显著性上调(<0.05)，说明Lja-SHP2在混合菌刺激后主要参与了鳃组织的免疫应答反应。为了进一步探究Lja-SHP2与淋巴细胞亚群免疫应答反应的相关性，本研究分别使用B细胞有丝分裂原脂多糖(lipopolysa­ccharide, LPS)和T细胞的有丝分裂原植物凝集素(phytohemagglutinin, PHA)免疫刺激日本七鳃鳗。经LPS免疫刺激后，与对照组相比，白细胞中Lja-SHP2蛋白表达显著上调，鳃组织和髓样小体没有显著性差异表达；但经PHA免疫刺激后，与对照组相比，白细胞、鳃组织和髓样小体3种组织中Lja-SHP2均有上调，尤其在白细胞中上调最为显著，大约是对照组的2.5倍，说明Lja-SHP2参与了日本七鳃鳗由PHA介导的免疫应答反应。由于PHA能刺激日本七鳃鳗鳃组织中VLRA+淋巴细胞的活化，这表明Lja-SHP2可能参与了PHA介导的VLRA+淋巴细胞亚群的免疫应答反应。上述研究结果为进一步探索Lja-SHP2在七鳃鳗免疫应答过程中的功能奠定了基础，也为揭示SHP2分子家族的系统发生及探索高等脊椎动物适应性免疫系统的早期发生及其进化历程提供一定的线索。

日本七鳃鳗；Lja-SHP2；抗体制备；免疫应答

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phospha­tases, PTPs)具有催化蛋白酪氨酸残基去磷酸化的功能，与能够催化蛋白酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases, PTKs)作用相反。在两者的共同作用下，蛋白酪氨酸残基发生可逆磷酸化，从而可以调节细胞膜酶联受体的信号转导，对生物的生长发育具有重要意义[1,2]。……