陈 倩，李 丹，佟 巍，蔡方舟，郭 智，鲍琳琳，王 卫

(北京协和医学院比较医学中心，中国医学科学院医学实验动物研究所，新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室，卫健委人类疾病比较医学重点实验室，北京 100021)

目前国内尚未建立理想的重症登革热动物模型，缺乏指导性强、可靠稳定的病原学指标。文献报告指出病毒的定量检测可针对病毒颗粒、病毒抗原、病毒核酸等[1]。传统方法有病毒分离方法，常用细胞培养分离和乳鼠颅内接种分离等，该方法比较可靠，但操作繁琐，实验周期长，不利于登革病毒的快速诊断。其次是抗原检测方法，酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)和免疫荧光法(IFA)等。但抗原检测方法操作繁琐，检测灵敏度较低，易与其他黄病毒发生交叉反应，产生假阳性[2-3]。在过去的几十年，分子诊断技术不断进步，使得检测和鉴定各种病原体更加可靠。其中实时荧光定量PCR方法逐渐成为病毒快速诊断的新的金标准。本研究对现有登革病毒RT-PCR检测方法进行优化，创建一步法实时荧光定量RT-PCR方法，并用于登革病毒感染小鼠模型的评估。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

2日龄SPF级BALB/c雄性乳鼠20只，体重2～3 g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司[SCXK(京)2019-0008]，用于登革病毒的扩增。4～6周清洁级C57BL/6背景的I型干扰素受体敲除小鼠(Ifnar1-/-)[SCXK(京)2014-0011]，雌雄各半，共计40只，体重18～22 g，由中国医学科学院医学实验动物研究所北方中心提供，用于登革热小鼠模型制备。动物实验方案得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用和管里委员会的批准(WW18002)。……