柄果海桐化学成分研究(III)*

2020-04-09张吕丽吴云飞李祖强罗蕾

云南师范大学学报（自然科学版） 2020年2期

张吕丽，吴云飞，李祖强，罗蕾

(1．云南师范大学化学化工学院，云南昆明 650500；2．云南大学化学科学与工程学院，云南昆明 650091)

海桐科(Pittosporaceae)海桐花属(Pittosporum)植物全球资源丰富，全世界约160种，主要分布于大洋洲、西南太平洋各岛屿、东南亚及亚洲东部热带[1].在我国海桐花属植物资源分布也较丰富，有46种，8变种，多分布于云南、四川、福建、广东、广西及贵州等地.云南有16种该属植物，其中柄果海桐(PittosporumpodocarpumGagnep)仅分布在云南和四川，是民间药用植物，其枝叶常用于治疗扁桃体炎、咽喉炎和止血等.前文已报道从滇产柄果海桐枝叶中分离、提纯并鉴定出16个化合物[2-3].本文报道从该植物中分离出的另外7个单体，鉴定为:二十四酸甘油酯 (tetracosanoicacid glyceride,1),β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (β-stigmasterol -3-O-β-D-glucopyranoside,2),β-豆甾醇 (β-stigmasterol,3),咖啡酸 (caffeic acid,4),(2S,3S, 4R,8E)-2-[(2R)-2-羟基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇((2S,3S,4R,8E)-2 -[(2R) -2-hydroxypentacosanoylamino]-8-octadecene -1,3,4 -triol，5),楤木脑甙(Aralia cerebroside,6),葡萄糖(glucose,7).单体1-7均属首次从此植物中分离得到.细胞毒试验表明，化合物2,3,5,6具有细胞毒活性.

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

Xevo TQ-S质谱仪(美国沃特世公司)；Advance 500型核磁共振仪(TMS为内标)(Bruker公司)；柱层析用37～75 μm及40～60 μm硅胶(青岛海洋化工厂)；薄层析(TLC)用F254硅胶片(Merck公司)；其余试剂均为分析纯.

1.2 提取和分离

柄果海桐枝叶35 kg，以95%乙醇浸泡，并浓缩提取液，得粗提物浸膏2.1 kg，此浸膏于索氏提取器中，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等五种有机溶剂依次提取，并浓缩提取液，分别得到五个组分：石油醚组分(100 g)、氯仿组分(80 g)、乙酸乙酯组分(80 g)、丙酮组分 (100 g)和甲醇组分 (800 g).各组分经过多次硅胶柱层析及重结晶等方法，提纯得到7个单体.

1.3 体外细胞毒性试验

用处于对数生长期的人白血病细胞系(K562)，采用细胞染色法，分别对柄果海桐中的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇萃取的五个组分进行体外细胞毒试验，绘制各个组分对K562细胞生长抑制率图，由此测算出半数致死浓度IC50，筛选出活性组分(IC50≤20 g/mL).采用同样的方法，对分离提纯所得的单体进行细胞毒试验，筛选出抗癌活性成分.

2 结果与讨论

2.1 组分及单体细胞毒活性

柄果海桐粗提物分步提取出的石油醚组分、氯仿组分、乙酸乙酯组分、丙酮组分和甲醇组分对K562细胞的IC50分别为4.6、12.0、20.0、31.0 μg/mL和33.0 μg/mL.试验结果表明，石油醚、氯仿及乙酸乙酯提取组分有一定的细胞毒活性.化合物2,3,5,6对K562细胞的IC50分别为12.0、4.6、20.0 μg/mL和14.0 μg/mL，具有一定的细胞毒活性.

2.2 单体结构鉴定

通过质谱(MS)和核磁共振(NMR)等波谱分析的方法，对分离提纯的7个单体分别进行结构鉴定，分别为:二十四酸甘油酯 (1),β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2),β-豆甾醇 (3),咖啡酸 (4),(2S,3S,4R,8E) -2- [(2R)-2-羟基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇 (5),楤木脑甙(6),葡萄糖(7).单体1-7均为首次从该植物中分离得到.化合物1-7的结构见图1.

化合物1,白色粉末，溶于吡啶，分子式为：C27H54O4，ESI-MS(m/z):465[M+Na]+，m.p.79～81℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N)(ppm)δ:4.12(2H,dd,J=5.5,1.5 Hz,H-1),3.94(1H,m,H-2),3.62(2H,m,H-3),2.34(2H,t,J=7.5 Hz,H-2′),1.63(2H,m,H-3′),1.25 (40H,m,J=26.1,21.6 Hz,H-4′～23′ ),0.85(3H,t,J=6.8 Hz,H-24′);13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm) δ:71.1(C-1),66.9(C-2),64.4(C-3),173.9(C-1′),34.6(C-2′),29.9～29.5 (C-4′～21′),32.3(C-22′),25.5(C-3′),23.1(C-23′),14.4(C-24′).上述波谱数据与文献[4]报道的数据基本一致,鉴定为二十四酸甘油酯.

化合物2,白色粉末，溶于吡啶，分子式：C35H58O6，ESI-MS(m/z):573[M-1]-，m.p.275～277 ℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N) (ppm)δ:5.34(1H,d,J=4.7Hz,H-6),5.19(1H,dd,J=15.1,8.7 Hz,H-22),5.07(1H,dd,J=15.1,8.6 Hz H-23),5.04(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′of Glc),4.59(1H,dd,J=12.0,1.5Hz,Ha-6′),4.41(1H,dd,J=12.0,5.6Hz,Hb-6′),4.30(2H,m,H-3′,4′) ,4.08(1H,t,J=7.8 Hz,H-2′),3.97(1H,m,H-5′),3.99(1H,m,H-3),1.06(3H,d,J=7.0 Hz),0.93(3H,s),0.91(3H,d,J=6.5 Hz),0.88(3H,t,J=7.0Hz),0.85(3H,d,J=6.5 Hz),0.65(3H,s).经波谱数据分析，并与已知物波谱数据及TLC对照[6-7]，鉴定化合物2为β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷.

化合物3,白色针晶，易溶于氯仿，分子式：C29H48O，ESI-MS(m/z):413[M+H]+，m.p.145～146 ℃.1H NMR(500 MHz,CDCl3) (ppm)δ:5.37(1H,d,J=4.7 Hz,H-6),5.18(1H,dd,J=15.1,8.7 Hz,H-22),5.03(1H,dd,J=15.1,8.6 Hz,H-23),3.55(1H,m,H-3),1.08(3H,d,J=6.6 Hz),1.04(3H,s),0.88(6H,d,J=6.4 Hz),0.82(3H,d,J=6.4 Hz),0.71(3H,s).经波谱数据分析，并与已知物波谱数据[5-6]及TLC对照，鉴定化合物3为β-豆甾醇.

化合物4,白色针晶，溶于甲醇，分子式为：C9H8O4，ESI-MS(m/z):163[M-H]-，m.p.224～227℃.1H NMR(500 MHz,Me2CO-d6) (ppm)δ:7.56(1H,d,J=15.9 Hz,H-3),7.05(1H,dd,J=9.0,4.5 Hz,H-9),7.00(1H,d,J=2.0 Hz,H-5),6.89(1H,d,J=8.2 Hz,H-8),6.28 (1H,d,J=15.9 Hz,H-2) .13C NMR(125 MHz,Me2CO-d6)(ppm)δ:167.3(C-1),114.2(C-2),145.4(C-3),126.8(C-4),115.0(C-5),145.0(C-6),147.8(C-7),115.5(C-8),121.6(C-9).上述波谱数据与文献[7]报道的数据基本一致,鉴定为咖啡酸.

化合物5,白色粉末，溶于吡啶，分子式为：C43H85O5N，ESI-MS(m/z):718[M+Na]+，m.p.131～132 ℃.13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm)δ:61.8(C-1),52.7(C-2),76.6 (C-3),72.7(C-4),33.6(C-5),26.5(C-6),33.1(C-7),130.6(C-8),130.5(C-9),32.8(C-10),29.5～30.4(C- 11～15),175.0(C-1′),72.2(C-2′),35.5(C-3′),25.6(C-4′),29.3(C-5′),29.5～30.4(C-6′～22′) 31.9(C-16,C-23′),22.7(C-17,C-24′),14.1(C- 18,C-25′).上述波谱数据与文献[8]报道的数据基本一致,鉴定为(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-羟基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇.

化合物6,白色粉末，溶于吡啶，分子式为：C40H77O10N，ESI-MS(m/z):754[M+Na]+， 770[M+K]+，1485[2M+Na]+，m.p.215～217 ℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N) (ppm)δ:8.58(1H,d,J=9.2 Hz,N-H),5.56(1H,dt,J=5.6,15.6 Hz,H-9),5.45(1H,dt,J=5.8,15.6 Hz,H-8),5.24(1H,m,H-2),4.95(1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),4.72(1H,dd,J=10.6,6.7 Hz,H-1),4.57(1H,m,H-2′),4.48(1H,dd,J=3.1,12.8 Hz,H-6″),4.33(1H,dd,J=5.1,12.9 Hz,H-6″),4.29(1H,m,H-3),4.33(1H,H-4 ″ ),4.19(2H,m,H-4,3″),3.99(1H,t,J=7.8 Hz,H-2″),3.88(1H,m,H-5″),1.24[s,(CH2)n],0.87[6H,td,J= 6.8,3.3 Hz,(-CH3)2].13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm)δ:70.7(C-1),52.0(C-2),76.2(C-3),72.7(C-4),32.4(C-7),131.2(C-8),131.0(C-9),33.3(C-10),176.1(C-1′),72.7(C-2′),105.8(C-1″),75.4(C-2″),78.7(C-3″),71.4(C-4″),78.8(C-5″),62.9(C-6″),35.9～23.3[(-CH2)25],14.6(C-18,C-16′).上述波谱数据与文献[9]报道的数据基本一致,鉴定为楤木脑甙.

化合物7,白色粉末，溶于吡啶，分子式为：C6H12O6，ESI-MS(m/z):203[M+Na]+，m.p.168～169 ℃.与标准样品用TLC对照一致，故鉴定化合物7为葡萄糖.

2.3 讨论

课题组在前期的筛选工作已确定滇产柄果海桐的粗提物具有抗癌活性，所以研究是在抗癌活性筛选结果指导下，对柄果海桐枝叶的有效部位进行分离提纯，鉴定出7个单体.这些单体均是首次从该植物中分离得到.通过细胞毒试验，发现其中的4个单体，β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2)、β-豆甾醇 (3)、(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-羟基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇 (5)和楤木脑甙(6)具有细胞毒活性，即为该植物中的抗癌活性成分.