流式细胞术检测HLA-B27抗原的表达及临床意义

2020-04-03廖德权成捷许蓝月

临床检验杂志(电子版) 2020年1期

廖德权，成捷，许蓝月

（广东医科大学附属医院检验科，广东湛江 524000）

HLA-B27属于具有遗传多态性的等位基因，和大部分疾病存在关系，特别是脊椎关节系统疾病，其中包含反应性关节炎、强制性脊柱炎以及Reiter氏综合征等[1]。此次研究探讨流式细胞术检测HLA-B27抗原的表达及临床意义，就相关内容进行报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料抽取1155例门诊和住院腰痛患者作为此次研究对象，选择流式细胞仪检测患者HLA-B27抗原表达，病例选择时间为2018年6月-2019年5月，男性患者705例，女性患者450例，年龄最大者为75岁，年龄最小者为11岁，平均年龄为（41.6±3.3）岁。

1.2 方法设备仪器：选择Beckman-Coulter NAVIO流式细胞仪，Beckman-Coulter原装HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE双荧光标记抗体，OptiLyse C溶血素。

操作：选择K3-EDTA抗凝真空管对患者进行标本收集，抽取1 mL外周血，白细胞浓度调整范围为4.0×109-10.0×109/L。选择患者全血100 μL，将HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE双荧光标记抗体20 μL加入其中，而后进行混匀，室内需要避光放置15-20 min，然后将0.5ml溶血素加入进行混匀，室内需要避光放置15-20 min，然后加入PBS 2 mL进行洗涤，洗涤次数为2次。上机检测获取的15000个细胞。

1.3 结果判断[2]采用Beckman-Coulter公司数据分析软件对数据实施分析，设门为淋巴细胞，对门内细胞抗HLAB27-FITC和抗HLA-B7-PE信号荧光强度进行检测。测定HLA-B7阴性而HLA-B27阳性细胞的平均荧光强度和所占百分比，平均荧光强度大于8.0或所占百分比≥90%即可判断为HLA-B27阳性。

2 结果

2.1 HLA-B27检测结果通过检测后可知705例男性患者中209例结果表现为阳性，比例为18.10%，450例女性患者中70例结果表现为阳性，比例为6.06%，1155例患者中279例阳性，比例为24.16%，相关数据见表1。

表1 分析HLA-B27检测结果

2.2 阳性患者年龄以及性别情况由表2可知，10-20岁患者49例结果为阳性，阳性率为4.24%，21-30岁患者中100例结果为阳性，阳性率为8.66%，31-40岁患者中49例结果为阳性，阳性率为4.24%，41-50岁患者中32例结果为阳性，阳性率为2.77%，51-60岁患者中33例结果为阳性，阳性率为2.86%，61-70岁患者中9例结果为阳性，阳性率为0.78%，71岁以上患者中7例结果为阳性，阳性率为0.61%。

3 讨论

HLA（人类白细胞抗原）为机体中抗原系统，具有高度多态性，广泛应用于器官移植、输血等方面，和多种疾病具有一定的关系，HLA-B27基因为MHCI类分子的等位基因，临床研究证实此基因和强直性脊柱炎等疾病存在关系[3]。强直性脊柱炎主要患病人群为青壮年男性，腰腿疼为主要症状表现，部分患者会出现髋关节疼痛以及骶髂关节疼痛，通常伴随晨僵，疾病引发因素并不确定。因为此病和其他疾病具有相似的症状，提升了诊断困难程度[4]。为此需要对HLA-B27进行正确检测，血清学分析方法是检测HLA-B27的常规方法，但是会因为细胞纯度、单价抗血清效价以及补体差异等因素产生影响，影响实验操作以及稳定性。选择流式细胞术检测并不需要对淋巴细胞进行分离，操作方便，选择单克隆抗HLA-B27和已知HLA-B27亚型进行结合，可将灵敏度提升[5]。同时和血清学分型进行对比可知，此检查方法省时，且具有良好的特异性以及灵敏度，当患者进行临床检查可疑为强制性脊柱炎，可将HLA-B27作为诊断主要指标[6]。本次研究经过分析后可知，1155例患者中279例阳性，比例为24.16%，其中男性患者209例，女性患者70例；年龄分布可知，10-20岁患者阳性率为4.24%，21-30岁患者阳性率为8.66%，31-40岁患者阳性率为4.24%，41-50岁患者阳性率为2.77%，51-60岁患者阳性率为2.86%，61-70岁患者阳性率为0.78%，71岁以上患者阳性率为0.61%。