李明

（山东省临朐县农业农村局 262600）

子宫内膜炎是奶牛场常见疾病，多由病原菌感染引起。当出现子宫内膜炎后，其繁殖能力会受到很大影响，从而影响奶牛的产乳能力[1]，给奶牛养殖业带来重大损失。想要更好的治疗奶牛子宫内膜炎，需要了解子宫内膜炎发病原因，因此，本文主要通过奶牛子宫内膜炎的病原菌分离鉴定和药敏试验来探究奶牛子宫内膜炎的发病原因，以期更好地为奶牛子宫内膜炎的防控治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验对象

试验选择某标准化规模奶牛养殖场27 头经临床诊断患有子宫内膜炎的奶牛进行观察试验，患牛没有经过治疗，且经诊断后不存在其他伤病。产后3 个月内屡配不孕，且出现子宫角粗大、子宫分泌物增多、阴道排出大量黄色或白色脓汁等现象。直肠检查时可以明显感觉到患牛出现子宫颈口开张的情况，所有患牛均进行常规饲养管理。

1.2 病料采集

首先，掏便处理。选定患牛后通过直肠检查的方式将患牛体内残余的粪便掏出，并彻底清洗患牛外阴部，清洗液选择0.1%的新洁尔灭溶液。其次，分泌物提取。完成外阴部清洗后，选择灭菌输精管送入到患牛的子宫颈当中，操作方式与人工授精术操作相同，通过灭菌输精管来有效提取患牛子宫内的分泌物，提取量控制在3ml 左右即可。完成分泌物提取后，将其装入实验室灭菌离心试管中，做好密封和编号，并在离心管上贴上相应标签，及时进行冷藏保存，冷藏温度控制在4℃为宜。最后，涂片制作。从离心管中将患牛的子宫分泌物逐一滴在载玻片上，每个载玻片滴1～2 滴既可，随后做好固定和染色，在显微镜上进行观察，了解病原菌的形态，并且将革兰氏阳性、阴性菌的比例记录下来。

1.3 病原菌分离鉴定

事先准备好实验用的肉汤培养液，然后将患牛子宫分泌物逐一接种到培养液中，温度调节至37℃进行增菌培养。完成增菌培养后，将营养液通过划线接种的形式接种到37℃的琼脂平板上，并且在琼脂平板上培养24h。将单个菌落挑取，制作成涂片，并且做好革兰氏染色，再进行显微镜检查。根据菌落的特征进行分离培养，其中疑是杆菌的菌落可以在康凯培养基上培养，并且根据病原菌的染色特征、菌体形态、菌落形态等进行分离，最后进行纯培养，培养基选择鲜血琼脂斜面，在逐个分离后进行生化检验。最后参照相关鉴定手册和方法，结合生化反应结果、镜检结果、革兰氏染色结果、菌落形态等做好病原菌分离鉴定。

1.4 药敏试验

将已经做好分离纯化的病原菌菌株分别接种到提前准备好的营养肉汤中，于37℃的温度下培养24h，取 0.2ml 培养物，将其涂抹在琼脂平板上，待充分干燥后，于每个琼脂平板放置6 片药敏纸片进行药敏试验，有效测定病原菌对药物的敏感性。

2 结果

2.1 病原菌分离鉴定结果

本次研究选择的27 头子宫内膜炎患牛子宫分泌物中病原菌共发现6 种，分别为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌，其中混合感染占比40.74%，单一感染占比59.26%，具体见表1。

表1 患牛病原菌感染情况

2.2 药敏试验结果

蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均对阿莫西林、环丙沙星、氨苄西林高敏感，大肠杆菌对阿莫西林高敏感，3 种病原菌对林可霉素、新生霉素均低敏感，具体见表2。

3 讨论

奶牛子宫内膜炎是一种病因复杂的疾病，该疾病主要由于细菌感染所致，但其他包括产道损伤、子宫积脓、子宫炎、产后处理不当等均会诱发子宫内膜炎[2]。如不及时治疗会给养殖户带来较大的损失。想要更好的治疗疾病，必须先了解疾病感染病原菌，该疾病感染的病原菌种类多种多样，通过常规方式很难准确判定[3]。因此，临床上将病原菌分离鉴定和药敏性引入其中，通过分别培养的方式能有效找出病原菌，同时药敏性试验还能更好的探究病原菌的药物敏感性，从而选择更多科学有效的药物，保证治疗效果[4]。

表2 药敏性试验结果分析

本次试验选择27 头感染子宫内膜炎的奶牛进行分析，结果显示，蜡状芽孢杆菌、大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌等奶牛子宫内膜炎常见病原菌，且单一感染的概率更高，其中蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均对阿莫西林、环丙沙星、氨苄西林高敏感，大肠杆菌对阿莫西林高敏感，3 种病原菌对林可霉素、新生霉素均低敏感。该研究结果与龚团莲[5]在相关研究中结果相似。另外，由于临床条件所限，本试验未进行细菌的厌氧培养，故针对厌氧菌的分离鉴定和药敏试验无法进行论述。

综上所述，做好奶牛子宫内膜炎病原菌分离鉴定和药敏性实验能为奶牛子宫内膜炎的治疗提供更多依据，临床价值较高。