袁丽红，王乙茹，钱锦花，杨向东，程志斌*

（1.云南农业大学，昆明 650201；2.玉溪农业职业技术学院，云南 玉溪 653100；3.昆明云岭广大种禽饲料有限公司，昆明 650200）

饲用抗生素耐药、残留、安全等问题促使我国农业部定于2020 年7 月禁止一切以促生长为目标的药物添加剂在畜禽饲料中使用[1-2]。因此，饲用益生菌等安全饲料添加剂的开发成为当前饲料行业的热点[3-4]。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是最早研发与应用于畜禽饲料的饲用益生菌[5]。大量研究表明，枯草芽孢杆菌主要通过分泌多种水解酶类补充肠道消化酶[6-7]，通过抑制有害菌调控肠道菌群平衡[8-10]，这些益生作用可改善畜禽营养摄入及健康状况，有利于维持和保障畜禽正常的生产性能[11-13]。

本课题组筛选了2株枯草芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌-I 有较强的消化酶分泌能力，但无明显的抑菌作用；枯草芽孢杆菌-Ⅱ是1 株具有抑制多种肠道有害菌的特殊菌株。鉴于饲喂单一功效的枯草芽孢杆菌已有大量试验报道，因此本试验将筛选的2株枯草芽孢杆菌组合以评估复合枯草芽孢杆菌制剂对肉鸡的饲喂效果，旨在指导肉鸡养殖生产中更好的选用商业枯草芽孢杆菌制剂产品。

1 材料与方法

1.1 试验用枯草芽孢杆菌及其益生作用的评估

枯草芽孢杆菌-Ⅰ和枯草芽孢杆菌-Ⅱ由课题组前期筛选。开展动物饲喂试验之前，经实验室评估2株枯草芽孢杆菌的产酶及抑菌益生作用，见表1。产酶益生作用的评估方法参考陶荣霞[14]的报道，以饲料原料小麦麸皮为培养基接种待测定的2株枯草芽孢杆菌，37 ℃下48 h 培养后，测定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶的活力[14]。抑菌益生作用采用体外抑菌实验的牛津杯法，参考朱沛霁[15]的报道。

表1 试验用枯草芽孢杆菌的产酶及抑菌益生作用

1.2 试验动物

216只1日龄AA肉公鸡分成3个组，如下：Ⅰ组，饲喂基础饲粮；Ⅱ组，在基础饲粮中添加300 g·t-1枯草芽孢杆菌-Ⅰ（1×1010cfu·g-1）；Ⅲ组，在基础饲粮中添加300 g·t-1复合枯草芽孢杆菌制剂（5×109cfu·g-1枯草芽孢杆菌-Ⅰ和5×109cfu·g-1枯草芽孢杆菌-Ⅱ）。每个处理组12 个重复，每个重复6只鸡，饲喂试验周期21 d。

1.3 试验饲粮

试验饲粮参照NRC（1994）肉鸡营养需要量配制，基础日粮组成及营养水平见表2。3 组试验饲粮中均不添加药物饲料添加剂及其他饲用益生菌、功能性替抗添加剂。

1.4 饲养管理

试验前，对鸡舍及鸡笼等相关养殖设施设备器具进行彻底的冲洗和消毒，通风净化后再开始试验。雏鸡进舍前24 h 鸡舍升温，控制温度不低于34 ℃。投喂试验饲粮3 次·d-1，自由采食和饮水。育雏第1 周温度为31～34 ℃，第2 周28～30 ℃，第3 周26～29 ℃。按场内常规免疫程序执行。勤观察试验鸡的健康状况，及时记录处理。

1.5 测定指标

以每个重复为单位统计肉鸡的初重、末重及采食量，计算21 d 内的平均日增重、平均日采食量、料重比。试验鸡均带有脚标，发现敷肛的腹泻鸡做好脚标记录，并用温水清洗处理。死淘鸡（包括：死亡和异常生理淘汰的鸡）如实记录。

1.6 统计分析

试验数据利用SPSS 软件中的单因素方差分析模块，选用LSD法进行统计，P＞0.05差异显著。

2 结果与分析

2.1 复合枯草芽孢杆菌对AA肉鸡生长性能的影响

表3 结果显示，Ⅲ组肉鸡的料重比显著低于I与Ⅱ组（P＜0.05），且I 与Ⅱ组的料重比差异不显著（P＞0.05）。此外，末重、平均日增重、平均日采食量等生长性能指标，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间统计差异不显著（P＞0.05）。

2.2 复合枯草芽孢杆菌对AA肉鸡腹泻与死亡情况的影响

由表4结果可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的腹泻率分别为8.3%、16.7%、9.7%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的死淘率分别为4.2%、8.3%、1.4%。由此可见，Ⅲ组添加复合枯草芽孢杆菌的肉鸡群体健康状况最好。

表2 基础日粮组成及营养水平

表3 枯草芽孢杆菌对AA肉鸡生长性能的影响

表4 枯草芽孢杆菌对AA肉鸡腹泻与死亡情况的影响

3 讨论

待饲喂的枯草芽孢杆菌-Ⅰ和枯草芽孢杆菌-Ⅱ的产酶与抑菌益生作用评估结果显示（表1），枯草芽孢杆菌-Ⅰ能够产较高的蛋白酶以及极其少量的纤维素酶，这说明枯草芽孢杆菌-Ⅰ主要产蛋白酶为主，该菌株产蛋白酶的益生作用与陶荣霞[14]、竺礼斌[16]和宋鹏等[17]的报道一致。枯草芽孢杆菌-Ⅱ能够抑制大肠杆菌、鸡沙门氏菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌，该菌株抑菌的益生作用与朱沛霁[15]、许国洋等[18]和张媛媛等[19]的报道一致。此外，枯草芽孢杆菌-I 无抑菌作用，枯草芽孢杆菌-Ⅱ只能分泌很少的蛋白酶、几乎不分泌淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶。上述结果表明，不同的枯草芽孢杆菌菌株，其益生作用差异较大，这与大量的前人综述报道一致[5,20-21]。进一步推测，这可能是动物饲喂试验生产性能差异的主要原因，据此本研究进一步开展了动物试验以验证这一推测。

无抗日粮条件下，与对照组相比，单一添加枯草芽孢杆菌-Ⅰ的肉鸡生长性能无改善作用（P＞0.05，表3）。该研究结果与朱金林等和胡长庆等的报道一致[22-23]。朱金林等研究发现，与对照组相比，饲用枯草芽孢杆菌对1～21 日龄肉鸡的平均日增重、平均日采食量、料重比等生长性能指标无显著影响[22]。胡长庆等也表明，他们筛选饲喂的4 株枯草芽孢杆菌对1～21 日龄肉鸡的平均日增重无明显改善[23]。课题组推测枯草芽孢杆菌-Ⅰ虽有产酶功能，但要发挥补充肠道内源酶不足的益生作用，显然受到肉鸡正常肠道消化酶分泌及饲料原料选择和营养水平的影响[22-23]。幼龄肉仔鸡生理各项功能发育不健全，良好的生长性能恰恰不仅仅受到营养的影响，更直接面临环境各种病原菌的危害，易发多种腹泻、感染等肠道疾病，造成幼龄肉仔鸡死亡及生长性能下降[24]。由于枯草芽孢杆菌-Ⅰ没有抑菌益生作用，这可能是单一添加枯草芽孢杆菌-Ⅰ的肉鸡生长性能没有改善的关键原因。

与对照组相比，添加复合枯草芽孢杆菌的肉鸡料重比显著降低（P＜0.05，表3）。研究结果与赵希彦和潘康成等的报道一致[25-26]。赵希彦发现，在饲料中添加枯草芽孢杆菌使1～21 日龄肉鸡饲料转化效率显著提高[25]。根据潘康成等的研究结论，饲用枯草芽孢杆菌改善肉鸡料重比的效果，前期（1～21日龄）优于后期（22～42日龄）[26]。本试验用的复合枯草芽孢杆菌中含有一株能够显著抑制肉鸡肠道有害菌沙门氏菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌的枯草芽孢杆菌-Ⅱ（表1），这可能是该组肉鸡获得良好生产性能的直接原因。

胡均等和陈彩文等的报道显示，添加枯草芽孢杆菌可显著增加肉鸡成活率[9,27]。本次研究结果也显示（表4）：复合枯草芽孢杆菌组肉鸡的腹泻率和死淘率显著低于对照组和单一枯草芽孢杆菌-Ⅰ组。秦瑶等筛选了2株能够抑制沙门氏菌和大肠杆菌的枯草芽孢杆菌菌株，且证明大部分枯草芽孢杆菌菌株以分泌消化酶的益生作用为主，获得抑菌益生作用的特定菌株较难[28]。刘秀侠等也报道支持这一观点[29]。Zhang 等用筛选的有抑菌功效的枯草芽孢杆菌菌株（编号：UBT-MO2）添加入饲料，发现显著抑制肉鸡肠道中的有害菌，这与体外抑菌实验结果相符[28-29]，是具有抑菌益生作用的特定枯草芽孢杆菌菌株改善肉鸡生长性能的关键原因。以上研究报道与本研究结果基本一致。

4 结论

本研究表明，饲粮中添加复合枯草芽孢杆菌、尤其是含有能够显著抑制肠道有害菌的枯草芽孢杆菌菌株，能显著改善无抗日粮条件下肉仔鸡的饲料转化效率与健康状况，保障肉鸡正常的生长性能。