韩烁 陶晓莎 黄鹏 刘庆伟 姜亮

【摘要】目的：优化灵杆菌核酸酶（NU）工程菌pET3c-NU/BL21STAR（DE3）pLysS 30L发酵罐培养及表达条件。方法：上罐发酵采用M9-YT-Glu发酵培养基，IPTG诱导;通过还原SDS-PAGE法测定目标蛋白表达量，RP-HPLC法测定乙酸残留量，以确定表达温度、时间等参数。结果：与讨论]NU重组菌诱导温度为30℃、加入终浓度0.2M IPTG诱导，维持诱导时间4hr，目的蛋白表达量占菌体蛋白总量的30%左右，为后续rNU融合蛋白纯化奠定了基础。

【关键词】灵杆菌核酸酶;重組表达;发酵条件优化

【中图分类号】R543

【文献标识码】B

【文章编号】2095-6851（2020）02-045-01

中国分类号 Q786 文献标识码 A

在人用预防及治疗类生物制品的质量标准中，核酸残留量是重要指标，直接关系到产品的安全性。在疫苗工业及蛋白质和多糖类工业中，应用灵杆菌核酸酶可将产品中的核酸污染降低至皮克级，目前，该方法已成为通用做法。我国是疫苗使用和生产大国，故灵杆菌核酸酶在生物医药产业特别是疫苗生产中具有非常广阔的应用市场[1]。

灵杆菌核酸酶是来源于粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens，又称灵杆菌）的非限制性广谱核酸酶，可在核酸链内的任意核苷酸间进行切割，并可切割任意形式的核酸。其酶切效率远高于其它核酸酶，活性是牛胰DNase I的34倍，是金黄葡萄球菌核酸酶的6倍[2]。

然而，灵杆菌是一种致病菌，对其大规模培养存在较大风险。目前市场上的主导产品为Merk公司生产的商品名为Benzonase的灵杆菌核酸酶，该产品已通过美国FDA的使用许可，广泛用于除去生物制品中的核酸，但产量低价格昂贵。……