陈晓梅，李树敏，韩旭晨，霍昱吉，李 静，陈士萍△

赤峰学院附属医院：1.检验科；2.心内科，内蒙古赤峰 024005

冠心病是最常见的心血管疾病，其发病机制为冠状动脉发生粥样硬化引起血管狭窄、痉挛或阻塞，导致心肌缺血、缺氧、坏死[1]。经皮冠状动脉介入术(PCI)是冠心病的首选治疗方法，能快速、有效地改善心肌血供[2]。PCI治疗后需进行抗凝治疗以预防血栓形成，氯吡格雷是临床上广泛使用的抗凝药物，但其发挥药物作用需要P450酶的辅助。CYP2C19基因属于细胞色素P450酶第二亚家族[3]，其不同的基因表型可对氯吡格雷的代谢产生影响，掌握CYP2C19基因多态性的分布情况对冠心病患者抗凝药物的选择具有重要意义。部分学者认为CYP2C19基因的多态性应在药物使用期间进行检测，以避免不良心血管事件的发生[4-6]。本文通过分析赤峰地区蒙古族冠心病患者CYP2C19基因多态性的分布情况，以期为临床个体化用药提供依据，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年3-12月于本院确诊为冠心病并行PCI治疗的患者558例为研究对象，其中蒙古族患者299例为研究组，汉族患者259例为对照组。研究组中男165例，女134例；年龄35.3～79.4岁，中位年龄54.2岁；所有蒙古族患者间无血缘关系。对照组中男146例，女113例；年龄39.7～68.2岁，中位年龄48.3岁。纳入标准：符合冠心病诊断标准；同意加入本研究并签署知情同意书。排除标准：合并其他严重心脏疾病者，如严重心力衰竭、心律失常等；合并严重呼吸、消化系统疾病或恶性肿瘤者；有精神障碍者。两组患者性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2仪器与试剂 血液标本基因组DNA提取试剂盒(凯普生物公司)；CYP2C19基因检测试剂盒(武汉海吉力生物科技公司)；基因扩增仪ABI7500(ABI公司)。

1.3检测方法

1.3.1DNA提取 取200 μL抗凝全血标本，加入20 μL蛋白酶K，加入溶液L震荡，56 ℃混匀，温浴15～20 min，期间颠倒混匀；加入200 μL无水乙醇，充分混匀后将液体转入带有硅胶柱的2 mL离心管中，10 000 r/min离心1 min，倒掉收集管中的废液；将离心柱放入收集管中，在硅胶柱中加入500 μL溶液W1(使用前检查是否加入无水乙醇)，10 000 r/min离心1 min；将离心柱再放入收集管中，在硅胶柱中加入500 μL溶液W2，10 000 r/min离心1 min；将离心柱再次放入收集管中，12 000 r/min离心3 min，倒掉收集管中的废液；将吸附柱放入新的1.5 mL离心管中,开盖静置1～2 min后，向吸附柱中加入100 μL的TE洗脱液，静置2～5 min，12 000 r/min离心2 min；弃柱得DNA；将所得DNA分装入1～6号管，依次加入6联PCR反应条(*1G、*1A、*2G、*2A、*3G、*3A)。每个单管中的DNA最佳上样量为10 μL，每次实验均加入阴性及阳性对照。

1.3.2ABI7500循环反应条件 95 ℃ 5 min,1个循环；95 ℃ 0.05 s ，58 ℃ 30 s,10个循环；95 ℃ 0.05 s， 58 ℃ 30 s,35个循环；收集信号 72 ℃ 30 s；选择FAM荧光。

1.3.3DNA质量检测 将提取好的DNA标本用紫外线分光光度计检测DNA的水平和质量。DNA的水平要求≥10 ng/μL，DNA的质量A260/280在1.8～2.0。将符合要求的DNA用TE稀释到0.1～20 ng/μL，要求最终加入6联PCR反应条中每个单管中的DNA总量为1～200 ng，最佳上样量为20～50 ng。

1.3.4CYP2C19基因多态性结果判定 选择1、2管根据野生型和突变型FAM信号Ct值判断标本CYP2C19*1的基因多态性；选择3、4管根据野生型和突变型FAM信号Ct值判断标本CYP2C19*2的基因多态性；选择5、6管根据野生型和突变型FAM信号Ct值判断标本CYP2C19*3的基因多态性，见表1。Ct值的确定使用自动设置基线，手动设置阈值线，同时选择阳性对照反应孔，可根据实际情况调节至FAM扩增曲线升起的拐点处，得到Ct值。阳性对照分析，1～6号管阳性对照FAM信号的Ct值一般小于25，波动范围在15～25。

表1 CYP2C19基因多态性结果判定

1.4观察指标 比较两组患者CYP2C19基因型分布情况；比较两组患者CYP2C19基因代谢型分布情况，其中代谢能力快的基因型为CYP2C19*1/*1，代谢能力慢的基因型为CYP2C19*2/*2、*2/*3、*3/*3，代谢能力居中的基因型为CYP2C19*1/*2、*1/*3。

1.5统计学处理 采用SPSS19.0软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组CYP2C19基因型分布情况比较 研究组CYP2C19*1/*1、*1/*2、*2/*3型所占比例均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；两组CYP2C19*1/*3、*2/*2、*3/*3型所占比例比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组与对照组中均以CYP2C19*1/*2型所占比例最高。见表2。

表2 两组CYP2C19基因型分布情况比较[n(%)]

2.2两组CYP2C19基因代谢型分布情况比较 研究组中间代谢型和慢代谢型基因所占比例低于对照组，快代谢型基因所占比例高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

3 讨 论

CYP2C19基因与氯吡格雷、S-甲莫芬、奥美拉唑、伏立康唑、地西泮等药物的代谢相关[7]。CYP2C19基因变异可导致个体酶活性的差异，使群体中出现超快代谢者、快代谢者、中间代谢者和慢代谢者4种表型，其中超快代谢者携带CYP2C19*1/*17和CYP2C19*17/*17基因，快代谢者携带CYP2C19*1/*1基因，中间代谢者携带CYP2C19*1/*2、*1/*3基因，慢代谢者携带CYP2C19*2/*2、*2/*3、*3/*3基因[5]。不同基因表型人群对药物的代谢能力不同，引起同一药物在不同人群中的药效差别。其中中间代谢者与慢代谢者需适当增加药物的使用剂量才能达到与超快代谢者或快代谢者相同的治疗效果[6-8]。

本研究中，汉族冠心病患者CYP2C19基因型分布情况：CYP2C19*1/*2型占比最高，为39.8%，CYP2C19*1/*1型为34.4%，CYP2C19*1/*3型为11.2%，CYP2C19*2/*2型为13.1%，CYP2C19*2/*3型、*3/*3型所占比例最低，仅为0.8%。与国内一些学者所研究的黑龙江、重庆等地区汉族人群CYP2C19基因分布情况基本相似[7,9]，说明我国不同地区汉族人群存在基因多态性分布相对一致的现象。

CYP2C19基因多态性具有显著的种族差异。CYP2C19*2基因在非裔美国人和中国人中的发生率分别为17.0%、30.0%，CYP2C19*3基因的发生率分别为0.4%、5.0%；高加索人和中国人中慢代谢型基因的发生率分别为3.0%、15.0%～17.0%[10]。本研究对汉族与蒙古族冠心病患者CYP2C19的基因型分布进行比较发现，蒙古族患者CYP2C19*1/*1、*1/*2、*2/*3型所占比例均高于汉族患者(P<0.05)。两民族CYP2C19基因代谢型分布情况比较，结果显示，两民族患者均以中间代谢型所占比例最高，其次为快代谢型，慢代谢型所占比例最低；且蒙古族患者快代谢型基因所占比例高于汉族患者(P<0.05)，慢代谢型和中间代谢型基因所占比例低于汉族患者(P<0.05)。考虑两民族之间CYP2C19基因型差异可能与遗传、生活方式等多种因素相关[10]。此外，临床上对中间代谢型或慢代谢型冠心病患者进行抗凝治疗时，可通过适当增加氯吡格雷的剂量或选用第3代血小板抑制剂来达到预期治疗效果[2]。

虽然CYP2C19基因型的检测可以针对性地指导个体用药，但目前基因检测费用较高，临床上并不能对所有需使用氯吡格雷等受CYP2C19基因型影响的药物的患者进行基因检测来指导药物的使用剂量，所以探索更为简便、费用低廉的检测方法仍是目前亟待解决的问题。

综上所述，赤峰地区蒙古族冠心病患者CYP2C19基因存在不同的基因型和代谢型，且与汉族冠心病患者间存在差异，掌握CYP2C19基因的多态性分布对冠心病患者抗凝药物的选择具有重要意义。