周洪英 孙 波 罗 帷 胡 柏 吴洪丽*

(1.湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉 430064；2.武汉设计工程学院食品与生物科技学院，武汉 430205)

桑黄为名贵传统中药，在中国、韩国等国家广受关注[1-2]。桑黄是一类桑黄属真菌的统称，桑黄属是最重要的药用真菌属之一，现有13个种，属于锈革孔菌目，寄生于赤杨皮、胡桃、忍冬、桑属、杨树、栎属、紫丁香属植物和锦带花上，具有抗癌、抗氧化、抗炎、降血糖、护肝等效果[2]。由于桑黄种及其宿主植物种的多样性，且桑黄子实体形态学特征与相似物种的差异不明确，加上桑黄本身极高的价值和关注度，将桑黄与其形似物种区分开来显得十分重要。

形态学鉴定与分子鉴定相结合，能有效进行微生物鉴定分类。本研究采集到一株形似桑黄野生真菌(LH02)，对其子实体进行组织分离得到纯培养分离株，进行转录间隔区(internal transcribed spacer，ITS)序列分析，结合形态学特征鉴定与分类。

1 材料方法

1.1 供试菌株及聚类用参考菌株

LH02，湖北省武汉市洪山区南湖边柳树上采集；

SH01，本室分离保存，经鉴定为桑树桑黄(Sanghuangporussanghuang)；

Sanghuangporusvaniniivoucher Dai8236,GenBank: MF772812.1

SanghuangporuspilatiiBRNM 771989, GenBank: KT428764.1

SanghuangporusquercicolavoucherDai 13947, GenBank: KY328309.1

SanghuangporussanghuangvoucherCui 14419, GenBank: MF772789.1

SanghuangporuslonicericolaDai8376, GenBank: JQ860308.1

SanghuangporusligneusMG13, GenBank: KR073082.1

SanghuangporusbaumiiDai16900, GenBank: MF772785.1

SanghuangporuszonatusCui8327, GenBank: JX069837.1

SanghuangporusalpinusvoucherCui124 85, GenBank: MF772781.1

Sanghuangporusweigelaevoucher Dai16 077, GenBank: MF772794.1

Sanghuangporuslonicerinusvoucher Dai 17095, GenBank: MF772787.1

Sanghuangporusmicrocystideusvoucher O 915609, GenBank: KP030787.1

SanghuangporusweirianusstrainCBS 618.89, GenBank: AY558654.1

Tropicoporusrudisvoucher O 915617, GenBank: MH101016.1

Tropicoporuslinteusvoucher JV 0904/64, GenBank: JX467701.1

Tropicoporusguaracastensisvoucher O 19228, GenBank: KP030794.1

TropicoporuspseudolinteusJV 0402/35-K, GenBank: KC778781.1

TropicoporussideroxylicolaJV 0409/30-J, GenBank: KC778782.1

Inonotusgriseusvoucher Dai 13436, GenBank: KX674583.1

Inonotushenanensisvoucher Dai 13157, GenBank: KX674581.1

Funaliatrogiiisolate XSD-37, GenBank: EU273516.1

Coriolopsistrogiistrain IFP 00751, GenBank: MG779615.1

Fomestruncatosporusisolate NW514, GenBank: EU622258.1

Alternariabokuraistrain 32, GenBank: FJ467353.1

1.2 培养基

PDA液体培养基：马铃薯洗净去皮挖芽，切成玉米粒大小颗粒，称取200 g加水1 000 mL熬煮，水沸后20～25 min，双层纱布过滤取滤汁定容至1 000 mL，加入葡萄糖20 g，pH自然。

PDA固体培养基：PDA培养基中添加1.5%琼脂粉。

1.3 菌株的分离培养

无菌条件下，用接种针取子实体内部组织，转至PDA平板中28 ℃培养7 d，观察平板上的菌落形态，再取少量菌丝接种于PDA液体培养基，摇床28 ℃，120 r/min培养至长出菌丝球。

1.4 DNA抽提，PCR和测序

取液体培养菌丝球液氮研磨，CTAB法抽提总DNA[3]，通用引物ITS5(GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG)、ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)用于扩增ITS rDNA及扩增产物测序。……