王彦丽 陈运平 闫世彬 夏景清 李智慧

临沂市中心医院，山东 临沂 261000

骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)是来源于多能造血干细胞恶性克隆性疾病，临床表现多为血栓、出血及髓外造血[1]。原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、原发性骨髓纤维化为经典MPN[2]。原发性血小板增多症(ET)是MPN的一个亚型，以血小板持续增多并伴有一系列临床症状为特征。自2005年MPN患者发现JAK2V617F基因突变[3- 5]，人们对MPN的发病机制有了新的认识。2013年，在ET及PMF患者中发现CALR基因突变[6- 7]。JAK2、CALR基因的发现使得MPN的发病机制有了新的生物学标志及预后指标，但不能解释不同MPN的显著差异。研究显示，几乎所有髓系肿瘤都有ASXLl检出并参与了肿瘤的发生发展，但ASXL1在ET中的突变情况及临床意义尚不明确[8- 9]。本研究分析了295例ET患者ASXLl基因突变情况，并与JAK2V617F、MPL及CALR各类基因突变比较临床指标差异，初步探讨其临床意义。

1 材料和方法

1.1 病历资料

选择我院2014年1月—2019年6月血液科收治的血小板增多症患者295例。中位年龄58(19～87)岁，其中女150例，男145例。均确诊为ET[10]。

1.2 ASXL1、JAK2V617F、MPL和CALR基因突变检测

提取骨髓样本中基因组DNA。ASXL1基因突变检测采用NGS。使用Illumina的Nextseq500测序仪进行双端测序。JAK2V617F突变采用AS- PCR荧光探针法检测。MPLexon10突变检测采用Sanger测序法。其上游引物序列为：TGACCTTGCGGGCCGAC，下游引物序列为：GATCTGGGGTCACAGAGCGA。使用3730XL测序仪进行电泳，采用DNA序列软件Sequencher V4.5进行突变分析。CALRexon9突变检测采用PCR+片段分析法。其上游引物序列为：FAM- CTGGTCCTGGTCCTGATGT，下游引物序列为：TCTCACAGAGACATTATTTGGC。PCR扩增后产物经纯化后，使用3500XL测序仪(Applied Biosystems，美国)进行高分辨率毛细管凝胶电泳，实验数据采用片段分析软件GENEMAPPERID V4.1(Applied Biosystems，美国)进行分析。……