脑卒中后抑郁(post stroke depression，PSD)是指脑卒中后病人出现的以心情低落、失眠、意识活动减少等为主要表现的情感障碍性疾病。据调查，脑卒中后2～5年内PSD发生率为30%左右[1]。多项研究显示，电针治疗能显著改善PSD的抑郁症状[2]。PSD属于脑卒中后病人的应激反应之一，而应激反应与皮质醇升高有关[3]。脑卒中后中枢系统和肾上腺系统的下丘脑垂体肾上腺(HPA)轴的调节功能发生紊乱[4-5]。下丘脑释放促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)，同时其促使脑垂体释放促肾上腺皮质激素(ACTH)，ACTH促使肾上腺释放皮质醇，当糖皮质激素受体(GR)检测到皮质醇增多时，其会传递负反馈信号促使下丘脑减少CRH的释放，这就是HPA轴的内稳态机制[6]。皮质醇增多、GR失敏与PSD的严重程度紧密相关。促炎症因子的水平升高激活炎症反应，促炎症因子如白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)等通过干扰GR的调节来扰乱HPA轴的功能。核因子κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及转录激活蛋白5(STAT5)是促炎症因子的主要介质，可通过各种活动抑制GR的功能[7-10]。促炎症因子也可通过激活GRβ来抑制GR的功能[11-12]。促炎症因子在海马体中聚集并损伤神经功能。有研究显示，抑郁病人体内的TNF-α、 IL-6含量较高[13]。本研究通过探究电针对PSD大鼠血清IL-1β、 TNF-α和IL-6表达的影响来阐明针刺治疗PSD的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组 选取雄性SD大鼠24只，体重220～250 g，3月龄，置于室温(24±2)℃、每12 h昼夜交替、(60±5)%湿度的动物房内。适应性饲养1周后将动物随机分为正常组、模型组、电针组，每组8只。

1.2 主要试剂与仪器 IL-1β检测试剂盒、TNF-α检测试剂盒、IL-6检验试剂盒(上海乔羽生物技术有限公司)；其他试剂均为国产分析纯。佳健牌针灸针(无锡佳健医疗器械股份有限公司)；Multiskan-3型酶标仪(美国Thermo)。

1.3 模型制备及方法 建立大鼠中脑动脉闭塞(MCAO)模型[14]：结扎右侧颈总动脉(CCA)和颈外动脉(ECA)的近心端，阻断颈内动脉(ICA)。在距 CCA 分叉部 5 mm 处剪小口，把线栓插入ICA。MCAO模型建立完成3 d后建立慢性不可预见性应激(CUMS)模型：潮湿垫料、冰水游泳、夹尾、禁水、悬尾、黑白颠倒、鼠笼倾斜 、禁食、行为限制等多种应激，每日随机安排，持续1个月[15]。正常组：即未经过MCAO术和CUMS术的大鼠；模型组：即MCAO术和CUMS术后大鼠；电针组：PSD模型大鼠予电针治疗，取穴百会、神庭，电针频率为2 Hz和20 Hz，每3 s交替1次，每日1次，每次30 min，连续治疗1个月。

1.4 观察指标及检测方法 ①行为学观察：实验前和实验第1个月后采用糖水实验和旷场实验评价模型大鼠行为学变化情况。糖水实验是在造模前训练所有大鼠适应饮用糖水，在测试前禁食禁水24 h，后同时给予一瓶糖水和一瓶纯水，通过1 h内大鼠消耗的蔗糖/消耗的液体总量比来测定大鼠的快感缺乏程度。旷场实验是将大鼠放置于1 m×1 m×0.5 m黑色敞箱底的中心方格内，记录大鼠在5 min内的活动情况，以至少3爪均进入的方格数记为移动次数。②运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量，每组取 8只大鼠，每只大鼠麻醉后，于腹主动脉取血5 mL，静置后，4 ℃、 3 000 r/min离心15 min，取上清液保存备用。首先稀释标准品，加入准备好的样品和标准品，每孔各加入标准品或待测样品100 μL，将反应板充分混匀后置37 ℃、 40 min。用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次，向滤纸上印干。每孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50 μL。将反应板充分混匀后置37 ℃、20 min，洗板。每孔加酶标抗体工作液100 μL。将反应板置37 ℃、10 min，洗板。每孔加入底物工作液100 μL，置37 ℃暗处反应15 min。每孔加入100 μL终止液混匀。30 min内用酶标仪在450 nm处测吸光值。随后画出标准曲线，根据样品OD值在该曲线图上查出相应的IL-1β、 IL-6和TNF-α含量。

2 结 果

2.1 大鼠行为学改变

2.1.1 糖水偏爱比比较 与正常组比较，模型组大鼠糖水偏爱比显著降低(P<0.01)；与模型组比较，电针组大鼠糖水偏爱比显著上升(P<0.01)。详见图1。

与正常组比较，※P<0.01；与模型组比较，#P<0.01图1 3组大鼠糖水偏爱比比较

2.1.2 旷场实验行为比较 与正常组比较，模型组大鼠移动次数显著减少(P<0.01)。与模型组比较，电针组大鼠移动次数显著增加(P<0.01)。详见图2。

与正常组比较， ※P<0.01；与模型组比较， #P<0.01图2 3组大鼠移动次数比较

2.2 大鼠血清IL-1β表达水平比较 与正常组比较，模型组大鼠血清IL-1β表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较，电针组大鼠血清IL-1β表达降低(P<0.05)。详见图3。

与正常组比较 ，※P<0.05；与模型组比较， #P<0.05图3 3组大鼠血清IL-1β表达水平比较

2.3 大鼠血清TNF-α表达水平比较 与正常组比较，模型组大鼠血清TNF-α表达水平显著上升(P<0.01)。与模型组比较，电针组大鼠血清TNF-α表达显著降低(P<0.05)。详见图4。

与正常组比较， ※P<0.01；与模型组比较， #P<0.05图4 3组大鼠血清TNF-α表达水平比较

2.4 大鼠血清IL-6表达水平比较 与正常组比较，模型组大鼠血清IL-6表达水平显著上升(P<0.05)。与模型组比较，电针组大鼠血清IL-6表达水平显著降低(P<0.05)。详见图5。

与正常组比较，※P<0.05；与模型组比较， #P<0.05图5 3组大鼠血清IL-6表达水平比较

3 讨 论

中医理论认为脑为髓之海，五脏六腑之精气均上充于脑，神又寄存于脑，脑神为心神所统帅，心脑共主神明，故健脑则神明，神明则抑郁症状减轻甚至消失，故治疗PSD以调神醒脑开郁为导向。根据近年来针灸治疗PSD的取穴规律，结合长期临床实践经验，提出以百会、神庭为主穴治疗PSD。百会、神庭为督脉穴，督脉总督诸阳，两穴合参可振奋阳气、醒脑开窍、畅达情志。

本研究结果表明，PSD大鼠糖水偏爱比和旷场实验移动次数显著下降，可显示其抑郁症状显著；而电针治疗可以明显改善PSD大鼠糖水偏爱比和旷场实验移动次数，说明电针可以有效地改善PSD大鼠的抑郁症状。PSD激活炎症反应， GR受抑制，CRH、ATCH增多，HPA失调[7]；炎症反应激活氧化应激反应，线粒体功能受损，GR再次被抑制，CRH、ACTH进而升高，加重HPA轴失调，进一步加重炎症反应，促炎症因子IL-1β、 IL-6和TNF-α增加[8-11，16]，最终呈恶性循环，加重PSD的抑郁症状。而电针治疗可显著减少促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，减少炎症反应进而抑制氧化应激反应，最终减轻PSD。

综上所述，电针能有效改善PSD的抑郁症状与减少促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，进而减少炎症反应。本实验为课题组进一步探究电针治疗PSD的机制奠定了坚实的基础，有关电针是否通过调节HPA轴从而减少促炎症反应来改善PSD的抑郁症状需要进行进一步的实验研究。