罗思敏，蔡德成，康廷国*，窦德强*

(1.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600；2.大连五州神草健康科技有限公司，辽宁 大连 116600)

孔雀草(TagetespatulaL.)是菊科万寿菊属一年生草本植物，又称红黄草、小万寿菊、臭芙蓉。其花色多样，颜色鲜艳，有黄色、橘色、红黄相间等，花瓣又分单瓣、重瓣，在国内作为经济美观的观赏性植物多用于园林栽培，香气四溢，可作芳香剂。孔雀草原产墨西哥，现多分布于四川、贵州、云南等地。文献记载，孔雀草具有清热利湿、止咳、止痛的功效，用于上呼吸道感染、痢疾、咳嗽、百日咳、牙痛、风火眼痛的治疗，外用治疗腮腺炎、乳腺炎[1]。国外学者研究孔雀草具有抗氧化、抗菌、抗炎、治疗心血管疾病等药理活性，俄罗斯高加索地区居民常食用孔雀草，有延年益寿之效。另有国外文献报道，孔雀草花可治疗高脂血症引起的肝损伤和抗脂质过氧化[2]。本课题组通过早期研究发现孔雀草有治疗慢性非细菌性前列腺炎的作用[3]，并在孔雀草中分离出黄酮及其苷类、叶黄素、噻吩类、甾醇以及挥发油等化学成分[4]。近年来中草药治疗肝病潜力巨大，前景广阔，皂苷类、多糖、黄酮类等成分在治疗肝脏疾病中具有显著的疗效[5]，从中草药中研究和开发是寻找新药的突破口，也是现代药学研究的发展方向。孔雀草常用药用部位为全草，孔雀草花却极少作为药用。本研究旨在探索孔雀草花对CCl4致小鼠极性肝损伤的保护作用，观察不同浓度的提取液对肝损伤小鼠的影响，为孔雀草的开发利用提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

ICR小鼠50只，雄性，体质量20～22 g，6～8周龄，由辽宁长生生物技术有限公司提供(许可证号：SCXK(辽)2015-0001)，置于室温(22±1)℃，相对湿度65%及正常昼夜节律调节光照时间环境下，食用标准饲料，自由饮水。

1.2 药物

孔雀草花于2017年6月20日采自辽宁省大连市金州开发区，由大连五舟神草健康科技有限公司提供，经辽宁中医药大学药学院王冰教授鉴定为菊科万寿菊属孔雀草TagetespatulaL.的干燥花。四氯化碳(天津大茂化学试剂厂，批号20171201)使用时用葵花籽油配制成0.5%的葵花籽油溶液。谷丙转氨酶(ALT)(批号：180525)、谷草转氨酶(AST)(批号：180525)、丙二醛(MDA)(批号：180525)、超氧化物歧化酶(SOD)(批号：180525)试剂盒均购于上海优选生物科技有限公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.3 主要仪器

TDZ4-WS低速台式离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；HH-S型电热恒温水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)；UV-2100 紫外分光光度计(上海UNICO公司)；FA-1004电子天平(上海精科天平厂)；KC-100型酶标分析仪(深圳凯特生物医疗电子科技有限)；BX51光学显微镜(日本O-LYMPUS公司)。

1.4 孔雀草花水提物制备

孔雀草干花用剪刀剪碎后用打粉机粉碎，称取药材粉末，加10倍量水浸泡过夜，加热回流提取1 h，滤布过滤；再加8倍量水加热回流提取1 h，滤布过滤，合并两次滤液，浓缩得到孔雀草花水提物，放至4 ℃储存备用。

1.5 动物分组给药及建模

50只小鼠按体重随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组，模型组，孔雀草花低、中、高剂量组(对应生药量为1.126 g/kg、2.252 g/kg、4.504 g/kg)。各给药组均给予相应药物，空白组与模型组给同体积蒸馏水，给药体积0.4 mL/20 g，连续灌胃10 d。末次灌胃2 h后，除空白组腹腔注射葵花籽油溶液外，其余各组均腹腔注射给予四氯化碳葵花籽油溶液(0.5%)，造模剂量为10 mL/kg，随后禁食不禁水[6]。24 h后摘取小鼠眼球取血，分离血清，颈椎脱臼处死小鼠并取肝脏。

1.6 检测指标

生化法测定血清中AST、ALT含量。

取肝脏左小叶约0.4 g，生理盐水冲洗后，组织匀浆，4 000 r/min离心5 min。取上清液备用，采用酶联免疫法测定肝脏组织中SOD、MAD含量。

1.7 肝脏病理观察

摘取肝右叶，置于4%的多聚甲醛溶液中固定48 h，石蜡包埋切片，常规Hema-toxy-Eosin(HE)染色，光镜下观察肝脏组织病理改变。

1.8 统计学方法

2 结果

2.1 对血清中ALT、AST活力影响

结果如表1所示，模型组小鼠血清中ALT、AST含量与空白组相比明显升高(P<0.01)，表明造模成功。而与模型组比较，中剂量组小鼠ALT活力降低(P<0.05)，血清AST活力明显下降(P<0.01)。高剂量水煎液对小鼠血清中ALT、AST活力有显著的抑制作用(P<0.01)。随着孔雀草花水提物给药浓度的增大，ALT、AST活力逐渐降低。

组别ALT(U/L)AST(U/L)空白对照组7.97±3.41**11.02±4.63**模型组23.46±6.06##33.07±9.37##孔雀草花低剂量组20.36±5.71##28.77±9.09##*孔雀草花中剂量组18.46±5.41##25.40±6.35##**孔雀草花高剂量组10.00±3.67**17.91±5.99#**

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 对肝组织中MDA含量与SOD活性的影响

结果如表2所示，模型组小鼠肝脏MDA含量与空白组相比明显升高，模型组小鼠SOD活力与空白组相比明显降低，表明造模成功。与模型组相比，低剂量组小鼠MDA含量明显降低(P<0.05)，SOD明显升高(P<0.05)。中剂量组和高剂量组小鼠MDA含量明显下降(P<0.01)，SOD活力显著上升(P<0.01)。提示孔雀草花有很强的抗氧化作用。

组别MDA(nmol/g)SOD(U/g)空白对照组29.16±8.01**2506.36±305.52**模型组39.26±8.51##1917.63±185.06##孔雀草花低剂量组32.05±7.56*2344.54±273.53*孔雀草花中剂量组30.59±4.25**2480.80±680.92**孔雀草花高剂量组29.03±5.31**2778.22±503.13**

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 对肝组织中IL-6、TNF-α含量的影响

结果如表3所示，模型组小鼠肝脏中TNF-α，IL-6含量与空白组相比明显升高，表明造模成功。与模型组相比，低剂量组小鼠IL-6水平明显降低(P<0.01)，中剂量组小鼠IL-6(P<0.01)、TNF-α(P<0.05)水平明显降低。高剂量组小鼠IL-6、TNF-α表达均有显著下降(P<0.01)。可见炎症因子与剂量呈依赖关系。

组别IL-6(pg/ml)TNF-α(pg/ml)空白组36.50±8.79**27.16±9.08*模型组47.33±6.02##35.36±8.48#孔雀草花低剂量组32.52±6.34**28.97±9.67孔雀草花中剂量组34.29±11.59**27.16±5.09*孔雀草花高剂量组36.65±12.12**22.73±9.59**

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.4 孔雀草花对小鼠肝组织病理学的影响

肉眼可见，正常对照组小鼠肝脏呈鲜红色，富有弹性，且表面光滑；模型组小鼠肝脏表面有大量颗粒状并带有黄褐色；孔雀草给药组小鼠肝脏颜色较正常对照组颜色稍浅，表面颗粒状较少，略有粗糙质感，损伤明显减轻。镜下观察，正常对照组小鼠肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，肝血窦排列规则，肝小叶结构完整；模型组可见肝小叶中肝细胞大小不等，有大片灶状坏死，细胞空泡，中央静脉周围有较多炎性细胞浸润，与对照组比较有明显差异，说明制备CCl4肝损伤模型成功。低剂量组小鼠肝组织形态结构有恢复，界线基本清晰；中、高剂量组小鼠肝细胞水肿，坏死程度不同程度减轻，细胞索排列较有序，肝组织炎症改善并伴有少量肝细胞再生；中、高剂量孔雀草花对CCl4致急性肝损伤均有明显保护作用。

(A)空白组；(B)模型组；(C)低剂量组；(D)中剂量组；(E)高剂量组

3 讨论

综上所述，孔雀草花能减轻CCl4所致的急性肝损伤，其保肝机制可能与抗氧化平衡和抗炎促炎平衡有关，但具体机制还需进一步探究。孔雀草作为一种观赏性植物，药用价值研究方面鲜有人问津，本文对其保肝作用进行研究，以期为将来孔雀草花应用于临床奠定基础。