付言峰，方晓敏，王锋超，潘晶晶，王学敏，涂 枫，赵为民，任守文

（1.江苏省农业科学院畜牧研究所/农业部种养结合重点实验室/江苏省农业种质资源保护与利用平台，江苏南京 210014；2.江苏省明天农牧科技有限公司，江苏 南京 210014；3.阜宁县畜牧兽医站，江苏 盐城 224400）

我国是一个养猪大国，国家统计局（http：//www.stats.gov.cn/tjsj/ndsj/2018/indexch.htm）数据显示，2017 年我国生猪出栏量为7.02 亿头，年底存栏量为4.4 亿头，猪肉产量5 451.8 万t，2017 年我国生猪出栏量约占世界生猪出栏总数的一半以上[1]。近年人们生活水平不断提高，加之我国人民的烹饪习惯，决定了肉质鲜美、风味独特的猪肉产品更受市场青睐[2]。外来猪种的肉质风味不及我国大多数地方猪，而以地方猪种为母本，导入外来猪种血统培育的新品种或杂交商品猪，更符合国人的消费方向，市场前景更广阔[3]。

苏山猪是江苏省农业科学院畜牧研究所养猪团队历经15 年，利用二花脸猪、梅山猪和杜洛克猪培育的一个新品种，于2018 年获得国家畜禽新品种（配套系）证书（编号：农01 新品种证字第28 号）（http：//jiuban.moa.gov.cn/fwllm/hxgg/201711/t20171124_5919183.htm）。苏山猪经产母猪产仔数13.6 头，有效乳头7 对以上，日增重786 g，料重比2.89，胴体瘦肉率59.4%，肌内脂肪含量2.56%，饲粮中粗纤维11.39%时仍可正常生长，是一个优质猪品种[4]。苏紫猪是江苏省农业科学院畜牧研究所养猪团队正在培育的优质瘦肉型黑猪新品种。该猪全身被毛黑色，腹部中等大小，背腰平直，具有繁殖力高、肌内脂肪含量高、肉色鲜红、大理石花纹明显、抗逆性强等特点，预计再经过2～3 个世代的持续选育，即可达到品种审定标准。苏山猪和苏紫猪经生产试用，市场欢迎度均较高。

为了挖掘苏山猪和苏紫猪的种质资源特性，提高其育种水平和生产效率，故从以下两个方面开展本试验：一是利用OSBORNE 种性测定站分析试验猪群的体重、采食量、采食次数、采食时间等采食数据，再分析猪群的采食习性，不同品种、性别和类型猪的采食差异性，估算每头猪的饲料报酬。二是利用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定试验猪血液中的猪生长激素（GH）和促生长激素释放激素（GHRH）浓度，再分析不同品种、性别和类型猪的GH 和GHRH 浓度差异。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验地点为江苏省农业科学院六合试验猪场，试验动物为苏山猪32 头，苏紫猪32 头，按性别、品种、类型、体重分成8 栏饲养（表1），试验期40 d，预试期5 d，正试期35 d。试验开始日期为2019 年5月14 日。试验开始时所有猪体重（30±3）kg，日龄（60±5）d。在测定第30 天时，对每一栏猪随机选取3 头猪（共24 头）进行猪生长激素（GH）和促生长激素释放激素（GHRH）浓度的测定。

表1 试验猪分组情况

1.2 主要试验仪器和试剂

生长性能测定：本试验采用8 套美国奥饲本（OSBORNE, FIRE）全自动种猪生产性能测定系统，进行种猪生长肥育性状测定，奥饲本测定站能准确记录猪的日采食量、采食次数、采食时间、采食时的体重等数据。

激素测定：芬兰（Labsystems Multiskan MS）352型酶标仪、芬兰（Thermo Labsystems）AC8 型洗板机、上海一恒隔水式恒温培养箱GNP-9080 型；江苏酶免（MEIMIAN）猪促生长激素释放激素（GHRH）ELISA 试剂盒96T、江苏酶免（MEIMIAN）猪生长激素（GH）ELISA 试剂盒96T。

1.3 测定流程

选择60 日龄左右公猪进入奥斯本测定站开测，100 日龄左右结束测定；测定过程中，采用自由采食和饮水、每栏8 头左右测定猪，测定站将自动获得每天的采食数据，包括体重、采食量、采食次数、采食时间等。接下来，试验人员每隔5 d 左右将测定站数据传送到电脑终端，同时备份。最后，我们将测得的原始数据导出，进行统计分析。

1.4 激素测定方法

猪生长激素（GH）和猪促生长激素释放激素（GHRH）酶联免疫吸附试验均根据试剂盒说明书进行测定。1）先进行标准品的稀释，即将150 μL 的标准品加入150 μL 标准品稀释液中稀释。2）加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 μL，待测样品孔中先加样品稀释液40 μL，然后再加待测样品10 μL（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3）温育：用封板膜封板后置37 ℃温育30 min。4）配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用。5）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5 次，拍干。6）加酶：每孔加入酶标试剂50 μL，空白孔除外。先后分别重复温育和洗涤1 次。7）显色：每孔先加入显色剂A 50 μL，再加入显色剂B 50 μL，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色10 min。8）终止：每孔加终止液50 μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）。9）测定：以空白孔调零，450 nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 min 以内进行。

1.5 数据统计分析

数量储存、筛选、分类汇总等整理通过Excel 和Access 软件分析。不同组别间测定数值的差异性显著水平通过SAS 8.2 统计软件包进行GLM 分析，结果以最小二乘均值±标准误（LSmeans±SE）表示。

激素浓度计算是以OD 值为横坐标，以标准物的浓度为纵坐标，绘出标准曲线，再用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

2 结果与分析

2.1 采食数据分析

试验期间共获得33 195 条采食数据，每一条采食数据均包括以下11 类信息：顺序号、测定站号、电子耳牌、日期、采食开始时间、采食结束时间、料槽初重、料槽末重、采食量、体重和投料量。

采食开始时间：自由采食贯穿全天24 h，其中下午16：00 为采食峰值，其次为下午17：00 和上午8：00；早晨5：00 至晚上19：00 间，中午11：00 为采食低谷。其他时间（晚上20：00 至次日凌晨4：00）均有采食，但采食次数均比较低。不同品种（苏山猪和苏紫猪）间、不同性别（公猪和母猪）间、不同类型（种猪和肥猪）间采食开始时间（小时）差异均不显著（表2）。

表2 试验猪不同采食时间采食次数分布（n=62）

各栏间试验猪比较结果显示：第7 栏猪收集到的数据量最高（4 799 条），第8 栏猪的最低（2 167条）。料槽初重比较，第4 栏猪最高，达到0.95 kg，其他栏都在0.72～0.79 kg 之间，其中第3 栏最低。料槽末重比较，第8 栏最高，达到0.596 kg，第2 栏最低，达到0.563 kg。次采食量比较，第4 栏最高，第3 栏最低（P＜0.05）。体重比较，第4 栏最高，第3 栏最低。次投料量比较，第4 栏最高，第2 栏最低。这些结果说明，体重和次采食量最高值和最低值比较结果一致，料槽初重、次采食量、体重和次投料量最高值均发生在第4 栏猪上（表3）。

不同品种、性别和类型猪间的采食数据比较结果显示：苏山猪、公猪和种猪均为30 头，数据采集量分别为15 889、15 277 和15 684 条；苏紫猪、公猪和肥猪均为32 头，数据采集量分别为17 306、17 918和17 511 条。品种间比较，苏紫猪的料槽初重、料槽末重、次采食量、体重和次投料量均显著高于苏山猪（P<0.05）。性别间比较，公猪的料槽初重、次采食量和次投料量均显著高于母猪（P<0.05），母猪的料槽末重和体重均显著高于公猪（P<0.05）。类型间比较，种猪的料槽末重显著高于肥猪（P<0.05），肥猪的料槽初重、次采食量、体重和次投料量均显著高于种猪（P<0.05）。这些结果说明，不同品种、性别和类型猪间的采食性状均差异显著，苏紫猪的所有采食性状均显著高于苏山猪（表4）。

表3 各栏料槽初重、料槽末重、次采食量、体重和次投料量等比较结果

表4 不同品种、性别和类型猪间料槽初重、料槽末重、次采食量、体重和次投料量等比较结果

2.2 日数据分析

日数据指每头试验猪每天采集的汇总性数据，所以每头猪每天会有一条日数据。表5 各栏间试验猪日数据比较结果显示：第7 栏猪收集到的数据量最高（456 条），第6 栏猪的最低（315 条）。日采食量比较，第6 栏猪最高，达到3.088 kg，第4、3、8 栏在2~3 kg 之间，第7、5、1 在1~2 kg 之间，第2 栏最低，低于1 kg。日采食次数比较，第3 栏最高（11.88次），其次为第4、8 栏，这两栏均不低于11 次；第5、1、7、6 栏均在9~11 次之间，第2 栏最低，低于6 次。日采食时间比较，第4 栏最高，为4 823.19 s，其次为第7、8 栏，均超过4 000 s；第5、1、6、3 栏均在3 000~4 000 s 之间，第2 栏最低，低于3 000 s。日体重比较，第4 栏最高，超过90 kg，远高于其他栏，第8、6 栏均在60~70 kg，第7、2 栏在50~60 kg，第5、1、3 栏在40~50 kg，其中最低的是第3 栏。这些结果说明，日采食时间和日体重均为第4 栏最高，日采食量、日采食次数、日采食时间均为第2 栏最低（表5）。

表5 各栏日采食量、日采食次数、日采食时间、日体重等比较结果

不同品种、性别和类型猪间的日数据比较结果显示：苏山猪、公猪和种猪均为30 头，数据采集量分别为1 586、1 420 和1 553 条；苏紫猪、公猪和肥猪均为32 头，数据采集量分别为1 478、1 644 和1 511条。品种间比较，苏紫猪的日采食量、日采食次数、日体重和日采食时间均显著高于苏山猪（P<0.05）。性别间比较，母猪的日采食量、日采食次数和日采食时间均显著高于公猪，体重相反（P<0.05）。类型间比较，肥猪的日采食量和体重显著高于种猪（P<0.05），而日采食次数和日采食时间则是种猪显著高于肥猪（P<0.05）。这些结果说明，不同品种、性别和类型猪间的日性状均差异显著（P<0.05），日采食量、日采食次数和日采食时间，均为苏紫猪高于苏山猪，母猪高于公猪（表6）。

表6 不同品种、性别和类型猪间日采食量、日采食次数、日采食时间、日体重等比较结果

2.3 猪生长激素（GH）测定结果

图1 用于测定猪生长激素（GH）浓度的标准曲线制定

对5 个猪GH 标准物（浓度已知），按照1∶1 对其进行稀释，再测定其OD 值，绘制出下面的标准曲线（图1），根据此标准曲线，测定试验猪血清的OD值，计算出其GH 含量（表7）。各栏之间比较结果如下：共8 栏猪，其中第2 栏的GH 浓度最高，为苏山猪公肥猪（即苏山猪阉猪），处于第一梯队；其次为苏紫猪母肥猪、苏山猪母种猪，处于第二梯队；剩下的第1、3、4、6、7 栏猪都处于第三梯队；第一梯队与第三梯队间GH 含量差异显著（P<0.05）。品种之间比较结果如下：苏山猪和苏紫猪间GH 含量无显著差异；性别之间比较结果如下：公猪与母猪间GH 含量无显著差异；类型之间比较结果如下：肥猪的GH 含量显著高于种猪（P<0.05），见图2。

表7 试验猪生长激素（GH）浓度

图2 不同品种、性别、类型猪的生长激素（GH）浓度比较

2.4 猪促生长激素释放激素（GHRH）测定结果

对5 个猪促生长激素释放激素（GHRH）标准物，按照1∶1 对其进行稀释，再测定其OD 值，绘制出GHRH 的标准曲线（图3），根据此标准曲线，测定试验猪血清的OD 值，估计其GHRH 含量。

各栏之间比较结果如下：共8 栏猪，其中第8 栏的GHRH 浓度最高（P<0.05），为苏山猪母肥猪，处于第一梯队；其次为第7、5、3、1、2 栏，处于第二梯队；最低的为第4、6 栏猪，处于第三梯队；第一梯队与第三梯队间GHRH 含量差异显著（P<0.05），见表8。不同品种、性别、类型猪的GHRH 浓度差异均不显著：苏山猪（39.89±2.19）μg/L，苏紫猪（45.94±2.25）μg/L；公猪（40.87±2.30）μg/L，母猪（44.97±2.35）μg/L；种猪（44.79±2.31）μg/L，肥猪（41.04±2.23）μg/L。

图3 用于测定促生长激素释放激素浓度的标准曲线制定

表8 试验猪促生长激素释放激素（GHRH）浓度

3 讨论与结论

猪饲料报酬（料重比）是一个非常重要的育种性状，随着种猪自动测定站的推广，育种场可以更加准确得获得猪采食数据。有研究指出，在每台设备不超过11 头的情况下，随着饲养密度的降低（自0.56 头/m2降低至0.44 头/m2），日采食次数、日采食时间及采食量逐渐增加，若再降低饲养密度则无显著影响[5]。本试验每个栏中平均饲料8 头猪，饲料密度约为0.8 头/m2。本研究表明，猪自由采食贯穿于全天24 h，其中下午16：00 为采食最高峰，其次为下午17：00 和上午8：00；白天的中午11：00 为采食低谷。晚上（20：00 至次日凌晨4：00）均有采食，但采食次数均比较低。不同性别（公猪和母猪）间、不同类型（种猪和肥猪）间采食开始时间差异均不显著。不同品种、性别和类型猪间的采食性状均差异显著，苏紫猪的所有采食性状均显著高于苏山猪。有研究表明，在自由采食情况下，猪的采食行为多发生在白天，圩猪阉公猪、阉母猪全期平均白昼（6：00～18：00）采食时间分别为夜间的2.82 和2.97 倍，在白昼的采食量分别为夜间（18：00 至次日6：00）的2.78 和2.74 倍[6]，大白猪的采食行为多发生在白天[5，7-8]。

生长激素（GH）与下丘脑分泌的促生长激素释放因子、抑制素、类胰岛素样生长因子和胰岛素等体内激素形成刺激和反馈机制，能降低脂肪含量，提高蛋白质合成量，促进矿物质元素的吸收，促进猪肌肉生长，提高胴体瘦肉率和饲料效率，改善胴体品质[9-11]。本研究结果表明，苏山猪公肥猪（即苏山猪阉猪）的GH 含量最高，苏山猪和苏紫猪间GH 含量无显著差异，公猪与母猪间GH 含量无显著差异，肥猪的GH含量显著高于种猪（P＜0.05），这说明阉割（因为肥猪经阉割处理）会对猪GH 含量产生影响。

促生长激素释放激素（GHRH）作为GH 的正性调控因子，能促进GH 的合成和分泌[12]。本研究表明，苏山猪母肥猪的GHRH 含量最高，苏山猪和苏紫猪间、公猪与母猪间、种猪和肥猪间的GHRH 含量均差异不显著（P＜0.05）。有研究表明，血清中GH和GHRH 含量对猪背最长肌肌纤维面积有正效应，可促进肌纤维生长[13]。GH 可使瘦肉型猪肌肉、皮肤和骨的沉积率增大，使各种肌纤维变粗[14]。

综上所述，自由采食时，猪只喜欢16：00～17：00和上午8：00 间集中采食，体重大的猪采食量更大，苏紫猪的所有采食性状均显著高于苏山猪，母猪日采食量、日采食次数、日采食时间均显著高于公猪，GH 和GHRH 的最高值不出现在同一栏猪中，肥猪的GH 浓度显著高于种猪。