张韫 高苏亚 唐一梅 邓佩颖 高慧

摘      要：对不同产地的盘龙七药材进行质量分析和评价。实验依据《中国药典》，采用显微鉴别、理化鉴别、薄层鉴别对盘龙七药材进行鉴别;对其水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、挥发性醚溶性浸出物进行测定;采用高效液相色谱法同时测定盘龙七药材中岩白菜素和儿茶素含量。结果表明：不同产地盘龙七药材中所含水分、浸出物、岩白菜素和儿茶素含量存在差异，为建立盘龙七质量标准提供依据。

关  键  词：盘龙七;质量分析;岩白菜素;儿茶素

中图分类号：R914.1       文献标识码： A       文章编号： 1671-0460（2019）09-1938-04

Abstract： The quality of Rhizoma Bergeniae Scopulosae of different areas was analyzed and evaluated. Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas was identified through microscopical identification， physicochemical identification and thin layer chromatography identification. The water content， the water-soluble extraction content， alcoholic-soluble extraction content and ether -soluble extraction content of Rhizoma Bergeniae Scopulosae were determined. The contents of bergenin and catechin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae were determined simultaneously by HPLC.The results showed that the water extract， soluble extraction content， bergenin and catechin contents in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas were different. The proposed method can be used to evaluate the quality of Rhizoma Bergeniae Scopulosae.

Key words： Rhizoma Bergeniae Scopulosae; Quality analysis; Bergenin; Catechin

盤龙七（Rhizoma Bergeniae Scopulosae）是虎耳草科（Saxifragaceae）岩白菜属（Bergenia）植物秦岭岩白菜Bergenia scopulosa T. P. Wang的干燥根茎[1]。盘龙七主要分布于秦岭太白山、柞水等地，作为“太白七药”之一[2]，具有收涩固肠、活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛等功效[3]，临床上常作为治疗慢性支气管炎、肺气肿、支气管哮喘等呼吸系统疾病的特效药物[4]。由此可见，盘龙七极具研发价值，受到研究人员的广泛关注。

崔莹[5，6]等从盘龙七中分离得到16种化合物：其中岩白菜素和儿茶素为其主要成分。目前有关盘龙七质量分析的研究主要集中在质量标准和含量测定。冯永辉等[7]考察了盘龙七药材的水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物、重金属、砷盐的含量，并初步建立了盘龙七的质量标准。迄今未见盘龙七系统的质量分析研究的报道。

本文依据《中国药典》（2015年版）对中药材质量标准的要求，主要进行鉴别、检查、水分测定、浸出物测定、含量测定等对盘龙七进行质量分析。通过对不同产地的盘龙七的质量分析，给出不同产地药材的差异性，为陕西地方药材盘龙七的深入开发和质量控制提供一定的实验参考，为盘龙七的质量标准提供科学依据。

1  实验部分

1.1  仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪、尼康550D型电子显微镜（日本尼康公司）、显微镜图像分析系统Smart V（日本尼康公司）、 KQ 5200DE型超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司）、GR-202型分析天平（日本AND公司）。

1.2  试剂与试药

盘龙七药材（产地陕西、四川）经西安医学院药学院生药教研室汪兴军老师鉴定为Bergenia scopulosa T. P. Wang的根茎。

岩白菜素对照品（批号：B10940-20mg，上海士锋生物科技有限公司），儿茶素对照品（批号：B10081-20mg，上海士锋生物科技有限公司）。甲醇、乙腈均为色谱纯（天津科密欧化学试剂有限公司）;其它试剂均为分析纯;实验用水为超纯水。

2  实验方法

2.1  显微鉴别

取不同产地的盘龙七药材适量，用药碾碾碎制成粗粉备用。用取样针取粉末适量，滴加2滴水合氯醛试液，用取样针进行搅拌，盖上盖玻片，若有气泡，从一边滴入适量稀甘油，用滤纸擦拭掉四周的液体，置于显微镜下观察。

2.2  理化鉴别

2.2.1  酚类成分

盘龙七药材粉末过60目筛，精密称取1.10 g，用无水甲醇浸泡1 h，超声（200 W）提取45 min，抽滤，滤液用无水甲醇定容于50 mL容量瓶即得供试品溶液。

FeCl3 反应：取1 mL供试品溶液于试管加入适量甲醇溶解，加入醋酸酸化后加入1～2滴1% FeCl3溶液觀察现象。

香草醛?盐酸反应：取供试品溶液滴在滤纸片上，干燥，喷洒香草醛-盐酸试剂，观察现象。

2.2.2  香豆素类化合物

异羟肟酸铁反应：取供试品溶液1 mL于试管中，滴加2～3滴7%的盐酸羟胺醇溶液和10%的氢氧化钠溶液，水浴加热至变色，冷却后滴加1%盐酸溶液调节pH=3～4，再加入1～2滴FeCl3试液，观察现象。

荧光反应：取供试品溶液1～2滴在滤纸上，干燥后在300 nm紫外灯下观察，观察现象。

2.2.3  苷类化合物

（1）Molisch反应

取供试品溶液1 mL，加入1～2滴10% a-萘酚试液，摇匀，倾斜管壁再沿试管壁加入1 mL浓硫酸，观察试管颜色变化。

（2）Fehling反应

取供试品溶液1 mL，加新制Fehling试剂，沸水浴加热数分钟，观察试管颜色变化。

2.2.4  黄酮类成分

（1）AlCl3反应

取供试品溶液1滴置于滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液2滴，吹干，于365 nm紫外灯下检视。

（2）氨试剂反应

用胶头滴管取供试品溶液1～2滴在滤纸上（斑点浓度集中），干燥后，将滤纸在浓氨水上熏蒸，立即置于360 nm紫外灯下观察。

2.3  色谱鉴别

2.3.1  岩白菜素和儿茶素对照品溶液的配制

精密称取岩白菜素0.51 mg，儿茶素0.55 mg分别置于5 mL容量瓶，用无水甲醇定容，即得0.10 mg/mL的岩白菜素和0.11 mg/mL的儿茶素对照品溶液。

2.3.2  供试品溶液制备

取盘龙七粉末约0.2 g，置于具塞锥形瓶中，加入无水甲醇20 mL，称定质量，超声处理40 min，冷却，用无水甲醇补足，摇匀滤过，取续滤液即得供试品溶液。吸取对照品和供试品溶液1～2μL，分别点样于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（1∶2∶0.2∶0.1）为展开剂展开，在254 nm紫外灯下观察。

2.4  水分测定

2.4.1  烘干法

按照《中国药典》（2015年版）一部附录IX H水分测定法中第一法（烘干法）测定。称取盘龙七药材粉末（过60目筛）3.0 g，在100～105 ℃的烘箱中干燥5 h，冷却，精密称定，再干燥1 h，冷却，根据减失的重量，计算盘龙七药材水分的含量。

2.4.2  甲苯法

采用药典（2015年版）一部附录Ⅸ H的第一法甲苯法，适用于含挥发性成分的药品。检读水量，并计算成供试品的含水量（%）。

2.5  浸出物测定

按照《中国药典》（2015年版）一部浸出物测定法项下的热浸法（附录X A），对盘龙七进行药材水溶性和醇溶性，挥发性醚溶性浸出物的含量测定。

2.5.1  水溶性浸出物测定

取供试品约1.0 g，精密称定，回流1 h，过滤精密量取滤液10 mL，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。计算供试品中水溶性浸出物的含量。

2.5.2  醇溶性浸出物测定

取供试品约1.0 g，回流1h，放冷，取下锥形瓶，精密量取滤液10 mL，蒸干后，干燥3 h，精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量。

2.5.3  挥发性醚浸出物测定

取供试品2～5 g，索氏提取器提取。加乙醚适量，加热回流8 h，挥去乙醚，残渣干燥18 h精密称定，加热至105 ℃干燥至恒重。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量。

2.6  含量测定

2.6.1  色谱条件

色谱柱：Eclipse plus-C18（4.6 nm×100 nm，3.5μm）;流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（V/V，11∶89），检测波长：275 nm;流速1.0 mL/min，柱温：室温;进样量：20 ?L。

2.6.2  对照品溶液和供试品溶液的配制

精密称取岩白菜素对照品10.1 mg置于10 mL的容量瓶，用甲醇定容，精密称取儿茶素对照品11.0 mg置于10 mL的容量瓶，甲醇定容。精密移取岩白菜素和儿茶素对照品溶液适量混合，制成0.92 mg/mL岩白菜素和0.083 mg/mL儿茶素的混合对照品溶液。精密称取陕西盘龙七0.250 7 g，四川盘龙七0.252 6 g分别置于25 mL容量瓶，加入甲醇，静置1 h，超声提取45 min，抽滤，续滤液经0.45μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。

精密吸取混合对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分别置于2 mL容量瓶，甲醇定容。按1.3项下色谱条件测定。

2.6.3  样品含量测定

精密称取盘龙七药材3份，每份约0.25 g，依据2.3.2项下制备供试液， 2.6.1项下色谱条件测定，记录岩白菜素和儿茶素峰面积，计算盘龙七药材中岩白菜素和儿茶素的含量。

3  结果讨论

3.1  显微鉴定结果

3.1.1  陕西药材

粉末深灰色。草酸钙簇晶和棕色块较多，形状大小不一，大型簇晶的晶块较大棱角较尖。淀粉粒较多，螺纹导管和梯形导管较少形状清晰，见图1。

3.1.2  四川药材

粉末浅灰色。草酸钙簇晶較多，簇晶晶块较大，棱角钝，多单独分布。未发现螺纹导管，梯形导管较小，但淀粉粒和棕色块明显，同时观察到明显的薄壁细胞，见图2。

盘龙七粉末显微鉴别结果表明，不同产地盘龙七的药材显微组织差异不大，大都存在淀粉粒、草酸钙簇晶、棕色块及梯形导管等显微特征。

3.2  理化鉴别结果

3.2.1  酚类化合物

FeCl3反应：在供试品溶液中加入FeCl3 溶液溶液均显紫色，说明盘龙七中含有酚类物质。香草醛-盐酸反应：在滤纸上滴有供试品溶液斑点处喷洒香草醛-盐酸均显红色，说明盘龙七中含有酚类物质。

3.2.2  香豆素类反应

异羟肟酸铁反应：供试品试管溶液加入异羟肟酸铁和盐酸溶液后均显紫色，说明盘龙七中含有香豆素类物质。荧光反应： 在300 nm紫外灯下观察，在供试品溶液处显示黄绿色荧光，说明盘龙七中含有香豆素类物质。

3.2.3  苷类化合物

Molisch反应：供试品试管内在浓硫酸与上层液面交界处出现紫红色环，说明盘龙七中含有苷类物质。Fehling试剂反应：滴加有Fehling试剂的供试品溶液试管沸水浴加热后试管中出现砖红色沉淀，说明盘龙七中含有苷类物质。

3.2.4  黄酮类成分

AlCl3反应：滤纸上滴加有供试品溶液处喷洒AlCl3溶液后在365 nm紫外灯下观察呈黄绿色荧光，说明盘龙七中含有黄酮类物质。浓氨水溶液反应：用氨水熏蒸滴加有供试品溶液的滤纸，在300 nm紫外灯下观察，显黄绿荧光，说明盘龙七中含有黄酮类物质。

3.3  薄层色谱鉴别结果

硅胶GF254薄层色谱结果见图3。

盘龙七药材薄层色谱结果表明，盘龙七供试品色谱在与岩白菜素、儿茶素对照品具有相同的色谱行为，盘龙七中可能含有岩白菜素和儿茶素成分。

3.4  水分和浸出物测定结果

陕西盘龙七药材中水分平均含量7.81%，水溶性浸出物平均含量为26.6%，醇溶性浸出物平均含

量为51.0%，醚溶性浸出物平均含量为1.6%;四川盘龙七药材中水分平均含量为8.6%，水溶性浸出物平均含量为32.8%，醇溶性浸出物平均含量为43.6%;醚溶性浸出物平均含量为2.2%。

3.5  含量测定

3.5.1  标准曲线绘制

岩白菜素回归方程为Y = 27 530X - 210.6（R = 0.999 0），儿茶素回归方程为  Y = 9 481.9X +1.9（R = 0.998 0），表明岩白菜素在0.092～0.46 mg/mL儿茶素在0.008 3～0.042 mg/mL的范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

3.5.2  样品含量测定

盘龙七药材中岩白菜素和儿茶素的含量测定结果见表1。

4  结 论

本次实验从显微鉴别、理化鉴别、色谱鉴别全面的对盘龙七药材进行了定性分析，为盘龙七药材质量标准的建立奠定理论基础。

参考文献：

[1]宋小妹， 刘海静. 太白七药研究与应用[M]. 北京：人民卫生出版社， 2011.

[2]董成梅， 杨丽川，邹澄，等. 岩白菜素的研究进展[J]. 昆民医学院学院， 2012， （1）： 150-154.

[3]冯永辉， 李鹏. 盘龙七中儿茶素的含量测定[J]. 安徽农业科学， 2011， 3（28）： 158–160.

[4] 王星， 张娜， 赵桦. 不同产地盘龙七中岩白菜素的含量的质量分析[J]. 陕西理工学院报， 2015， 02（2）： 62–65.

[5]崔莹. 盘龙七化学成分的研究（I）[J]. 中成药， 2011， 33（9）： 1546–1549.

[6]崔莹. 盘龙七化学成分的研究（II）[J]. 中成药， 2012， 43（9）： 1704–1707.

[7]冯永辉， 郭耀武，等. 盘龙七的质量标准研究[J]. 药物分析杂志，2014， 34（4）： 74–77.