袁林 冉丽娟

（重庆市万州食品药品检验所 重庆 404100）

1 前言

痰咳净片主要由桔梗、咖啡因、远志、冰片、苦杏仁、五倍子、甘草等组成，具有通窍顺气、止咳、化痰等功效，可用于治疗支气管炎、咽炎等引起的咳嗽多痰、气促、气喘等。现行痰咳净片的成分含量测定项目中只有咖啡因的限值要求，并没有对其中含量占比最大的冰片的含量检测做出具体规定[1]。本文采用毛细管气相色谱结合外标法，对痰咳净片中冰片的含量进行测定。

2 仪器与试药

2.1 仪器

Agilent 7890A 气相色谱仪（美国某公司）；梅特勒CP224S 型电子分析天平（瑞士某公司，分度值为0.1 mg）；KQ-800DE 型超声波发生器（昆山某限公司）；自动进样器CTC PAL（瑞士某公司）。

2.2 试药

龙脑对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110881-201508，含量为96.8%）；水杨酸甲酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110707-201815，含量为100.0%）；痰咳净片（吉林某药厂，批号分别为20181203、20190174、20190526；规格：每片重0.2 g）；醋酸乙酯（分析纯，重庆某公司）。

3 方法与结果

3.1 方法

3.1.1 色谱条件

采用安捷伦DB-5 毛细管气相色谱柱（规格为30 m×0.32 mm，0.25 μm）；柱温：150℃保持10 min，以10℃/min 升至230℃保持3 min，检测器为氢火焰离子化检测器FID，进样口温度为220℃，检测器温度为250℃，按照5∶1 的比例，选用高纯氮气作为载气，并将其流速设置为1.0 mL/min。同时，将尾吹气流速设置为25 mL/min、氢气流速设置为30 mL/min、空气流速设置为300 mL/min、进气量设置为1 μL[2-4]。气相色谱图结果详见图1。

图1 气相色谱图

3.1.2 供试品溶液的制备

称取样品10 片，研细，精密称取1.0 g，置25 mL量瓶中，加入内标溶液10 mL，超声处理5 min 后，用内标溶液稀释至刻度线，摇匀，静置，使用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得[5-7]。

3.1.3 对照品溶液的制备

量取0.2 g 龙脑对照品，将其置入100 mL 的量瓶中，使用内标溶液对其进行溶解，达到刻度线后摇晃均匀。

3.1.4 阴性样品溶液的制备

按处方量规定制备不含冰片的阴性样品（由吉林某企业提供），精密称取样品1.0 g，置25 mL 量瓶中，精密加入内标溶液10 mL，超声处理5 min 后，用内标溶液稀释至刻度线，摇匀，静置，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

3.1.5 内标溶液的制备

称取0.1 g 水杨酸甲酯对照品，将其置入100 mL的量瓶中，使用醋酸乙酯对其进行溶解，达到刻度线后摇晃均匀。

3.2 校正因子的测定

量取“3.1.3”项中的对照品溶液5mL，其置于10mL量瓶中，使用内标溶液对其进行稀释，达到刻度线后摇匀。使用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，计算校正因子，得到校正因子平均值为0.785 21，RSD=1.56%，n=6。

3.3 线性关系实验

连续6 次（各0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.0 mL）量取“3.1.3”项中的对照品溶液，置于100 mL 量瓶中，使用内标溶液分别将对照品溶液进行稀释，达到刻度线后摇匀。使用气相色谱仪分别对上述6 种溶液进行测量。选定溶液浓度为横坐标，选定龙脑面积为纵坐标，通过绘制标准曲线后得出线性方程公式为Y=2 166.56X-10.36（r=0.999 84）。通过分析其线性关系可知，龙脑质量浓度为0.135～1.350 mg/mL 时，和峰面积的线性关系较好。

3.4 精密度实验

在上述“3.1.1”项同等条件下，连续6 次量取“3.1.3”项中的对照品溶液进行测量，结果显示，龙脑峰面积RSD 为1.27%（n=6），表明其精密度较高。

3.5 稳定性实验

取“3.1.2”项下的1 份供试品溶液于室温放置，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 后测定结果，记录色谱图。结果显示，龙脑峰面积RSD 为1.20%（n=7），表明供试品在24 h 内龙脑的含量是相对稳定的。

3.6 重复性实验

取同一批次痰咳净片样品（批号为20181203）6 份，按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，在同一条件下注入气相色谱系统。结果显示，样品中龙脑的平均含量为99.81%，RSD=1.33%（n=6）。

3.7 回收率实验

取阴性样品6 份，置25 mL 量瓶中，分别精密加入龙脑对照品约10 mg，按“3.1.2”项下供试品同法处理，计算得到龙脑的回收率，得出平均回收率为97.9%，RSD 为0.67%（n=6），结果详见表1。

表1 回收率实验结果

3.8 检出限

取对照品溶液适量，经逐级稀释，分别注入气相色谱仪，计算信噪比，以信噪比约为3∶1 时的浓度作为检出限，得出龙脑的检出限为0.15 μg/mL。

3.9 样品的检测

采用本方法，取同一厂家3 批次正常生产的产品进行检验，结果详见表2。

表2 检验结果

4 讨论

4.1 本方法的意义

冰片主要由较易挥发的龙脑和异龙脑组成，目前气相色谱法测定其含量是较为准确的方法。现行痰咳净片的质量标准中主要包括性状、鉴别、浸出物与咖啡因的含量测定，但目前并未对其中含量较高的冰片进行含量测定，缺乏对冰片进行量化的标准。本文采用简便易行的毛细管气相色谱法对冰片的含量进行测定，建立了冰片的含量测定方法，可以科学、准确地测定冰片的含量，能更好地控制其质量。

4.2 毛细管气相色谱柱的选择

根据龙脑的极性，分别比较了DB-5、DB-624、HP-INNOWax 色谱柱在不同柱温及程序升温的条件下的出峰时间快慢、峰形、理论塔板数及峰面积的RSD值，优选出了DB-5 毛细管色谱柱。

4.3 提取溶剂的选择

提取溶剂选用了乙醇、甲醇、异丙醇与醋酸乙酯。实验表明，用醋酸乙酯作为提取溶剂时，龙脑提取率较高，所以最后选择醋酸乙酯作为提取溶剂。

5 结语

本文使用毛细管气相色谱法测定痰咳净片中龙脑的含量，该法操作简单、结果准确、重复性好，可用于控制制剂的质量，同时也可以为其他含有龙脑的制剂含量的测定提供参考。