阿依江·卡那提拜克 张丹 米吉提·莫合他尔汗

摘 要 布鲁氏菌可在人和牲畜间传染，所引发的布鲁氏菌病具有人畜共患特点。被布鲁氏菌感染的动物如果怀孕将会流产，未孕则会导致不孕不育，布鲁氏菌感染引发的疾病将会导致畜牧业遭受重大经济损失，该病被人传染后对于人体生命健康极大，布鲁氏菌由于可在人群间传播曾作为生物战制剂，布鲁氏菌检测技术受关注程度较高。

关键词 布鲁氏菌；检测制剂；检测新技术

1 引言

布鲁氏菌病可简称为补兵，布鲁氏菌病临床确诊主要依赖于化验结果，需要使用检测制剂，可知布鲁氏菌病的防治工作不能脱离生物检验技术，必须使用相应的生物制品进行免疫防治。布鲁氏菌诊断制品的质量对与患者能否确诊得到有效的对症治疗较为关键，对于患者预后影响较大，同时对于疫情监测点评估影响较大[1]。本文旨在分析布鲁氏菌的检测制剂以及有关检测新技术，详见下文：

2 布鲁氏菌检测制品的淘汰与更新

应用于人群中防治布鲁氏菌病的生物制品需要秉承安全、敏感性好以及特异性高的之别原则，其中安全性属于最为重要的原则，应用体外诊断的生物制品则要求诊断结果可靠和准确。

2.1 新制纯化布鲁氏菌素替代旧菌素

1921年粗制菌素工艺无法测出菌素含量，各个批次间的品质控制较难，病人使用后通常会出现严重的局部反应，例如注射后周围皮肤会发生水泡和脱皮，严重者还会引发淋巴结炎。注射者还会有全身不良反应，发生体温上升、四肢关节疼痛以及全身乏力。对现有菌素进行淘汰后，改进制品质量，研制得到纯化布鲁氏菌素，经过动物试验表明安全性较好，后应用于人体安全性好，不良反应发生率较低。

2.2 酸性虎红抗原取代旧玻片抗原

上世纪初，应用玻片凝集试验属于检验人畜流行疾病的快速筛查方式，可快速检测，将高浓度菌液放置于高浓度盐水中，使用结晶紫与孔雀绿染料进行染色，操作频繁的情况下将会导致假阳性时。应用酸性缓冲玻片抗原可用以取代旧玻片抗原，可降低假阳性检出率。酸性缓冲玻片抗原利用PH值呈酸性的高浓度军爷，经过标准血清化工序，应用虎红染料进行染色，活化IgG，操作简便，基本不会产生假阳性现象，判定结果更加简便。

3 布鲁氏菌检测技术

3.1 细菌学检测技术

细菌学检测技术常用于实验室检测，检测所需的动物样本可从流产胎儿、胎衣、奶样以及血液中制取，而检测人体病原菌所需样本可从尿液、骨髓以及血液中取得。布鲁氏菌种属不同其生长状况差异也越大，以牛型布鲁氏菌为例，从宿主中分离后初期生长速率较慢，同时对于生长环境的要求较高，必须要适量的二氧化碳，上述特点导致应用细菌学检测技术检测牛型布鲁氏菌周期非常长，一般需要二至四周的无菌生长时间，才可得出最终检测结果。研究指出应用骨髓培养法可缩短培养时间，但该分离技術费时费力，同时检测准确性也不高[2]。

3.2 免疫学检测技术

免疫学检测技术中有血清凝集试验、酶联免疫吸附试验、补体结合试验、免疫荧光试验以及胶体金免疫层析技术。血液凝集中的试管凝集试验由于特异性和灵敏度不高，检验结果受人为因素影响较大，实际操作不便捷，因此不主张使用试管凝集试验，布鲁氏菌病的检验应用试管凝集试验具有局限性，可采取综合多种检测手段的方式用以提升检测正确率。酶联免疫吸附技术属于诊断特异性高，同时灵敏度也较高，因此临床推广应用价值较高。酶联免疫吸附技术可检测IgG、IgM和IgA抗体，随着生物技术的发展，用于检测包括牛、羊和猪在内的iELISA检测方法被建立，利用抗原抗体转移性特点，检测抗体，其中双抗夹心法通常终于检测大分子抗原，竞争法用于检测小分子抗原。补体结合试验虽然特异性强，但是操作较为复杂，检测条件较为苛刻，导致实际应用受限。免疫荧光检测法利用布鲁氏菌结合抗体后出现特异性的细菌性荧光特点急性检测，由于其具有属特异性，不能区分牛、羊和猪生物物种。胶体金免疫岑溪技术属于新型标记技术，不仅操作简单，同时需要的样本量较少，可节省检测资金，不仅适用于诊断布鲁氏菌病，同时还可用于流行病学调查和现场使用，近年来发展较为广泛。

3.3 分子生物学检测技术

PCR（聚合酶链反应）检测、基因检测以及核酸探针与分子斑点杂交技术均属于分子生物学检测技术，可用于检测布鲁氏菌。PCR技术检测特异性强，灵敏度高且不会破坏样本，加上检验操作较为简便因而应用范围越来越广。应用PCR检测技术可快速检测鉴别布鲁氏菌，多重PCR和荧光定量PCE由于在检验检疫、诊断以及流行病学调查方面的应用效果较好，而广泛应用。随着信息技术的发展，PCR结合芯片技术和与微流体技术，进行技术融合，可同时快速处理和分析大量样品，可极大程度上提高检测效率，有助于布鲁氏菌快速检测与分型。基因检测技术而非常可靠，应用微生物基因测定法测定GC含量与Tm值，通过核算杂交技术辨别微生物类型非常简单[3]。核酸探针与分子斑点杂交技术利用PCR反应扩增差异片段后设计探针，纯化后进行斑点杂交。该方法用于检测布鲁氏菌非常可靠，具备灵敏度好和重复性好的优势。

4 结语

综上可知，当前并未有一种单一的检测技术可用于布鲁氏菌病检疫，当前主要的检测方法为细菌学检测和免疫学检测，PCR技术和ELISA检测方法敏感性和特异性均较高，且具备检测等待结果时间短的优势，因此常用于布鲁氏菌防治。随着科学技术的发展，诊断技术还将会不断精进，更加先进的检测方式可用于布鲁氏菌病防治中。

参考文献：

[1]丁雪，王岩，刘丽蓉，肖肖，邓洪宽，周晓翠.布鲁氏菌病检测和防治方法研究进展[J].中国动物检疫，2019，36（05）：43-48.

[2]魏春霞，孙淼，赵炜，陈延飞，刘怀东，张敏，李岭，陈建，才学鹏，曾巧英，薛青红.牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎可视化基因芯片检测方法的建立[J].中国兽药杂志，2019，53（04）：6-15.

[3]赵鸿雁，李积权，路殿英，朴东日，姜海.一种改良的布鲁氏菌病抗体微量凝集检测方法的建立与评价[J].中国人兽共患病学报，2019，35（02）：149-152.