朱玉瑶 陈佳 丛文铭

（海军军医大学附属上海东方肝胆外科医院病理科 上海 201805）

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC），是我国常见的肝脏恶性肿瘤，本课题组曾较早开展了多结节性HCC克隆特点研究，提出了单克隆（IM型）和多克隆（MO型）两大起源模式[1-2]。IM型是指肝内残留癌细胞的复燃生长，而MO型本质上为一个新生肝脏肿瘤。本研究采用荧光PCR-毛细管电泳技术检测了周边肝组织及HCC的5个独立结节，分析周边肝组织与肿瘤组织各个结节的克隆起源。

1.材料与方法

1.1 样本信息

选取海军军医大学东方肝胆外科医院收治一例原发性肝癌标本，因体检发现甲胎蛋白386.5ng/ml，CT提示肝左叶占位，行“左肝部分切除术”。

1.2 微卫星位点选择：

根据文献与HCC克隆起源相关的基因，以及肿瘤发生发展相关的抑癌基因，选取了10个微卫星位点进行检测，并采用不同荧光标记对引物进行标记[3]。位点信息为如 下：FAM标 记 的D8S520、D16S514、D8S246、D16S419、D1S507、D17S831、D13S268，HEX标记的D1S243、D17S938、D16S505。

1.3 PCR-CE实验方法

采用PCR-毛细管电泳法检测分析克隆起源，PCR反应参照zhao等的报道[4]，最后在ABI 3500测序仪上进行毛细管电泳。

1.4 结果判断方法

结果判读方法参照zhao等的报道[4]。

2.结果

2.1 病理结果

肝脏标本14×8×5cm，切面见5个灰白色肿物（T1-T5），直径1～2.5cm，病理诊断：5结节均为肝细胞癌，硬化型，Ⅲ级。

2.2 免疫组化结果

5个结节免疫组化染色结果基本相同，HePar-1（-），Arginse（-），CK7（+），GPC-3（+），HBsAg（+）。

2.3 克隆起源检测结果

通过上述方法对HCC的5个结节（T1-T5）进行克隆起源检测，结果为：与正常组织（N）相比，肿瘤组织在10个微卫星位点处存在缺失（图1）；5个结节之间进行比较，结节T2和另外4个结节均检出了3个或以上的等位基因缺失，提示结节T2与其他4个结节为不同克隆来源，结节T1,T3-T4之间出现了≤2个等位基因缺失，提示该4个结节为相同克隆来源。

3.讨论

一般认为多结节HCC的发生主要有3种可能，第一种是肝内种植转移（intrahepatic metastasis，IM型），与原发肿瘤为相同克隆来源，即克隆起源；第二种是不同部位的肝细胞在慢性肝炎或肝硬化背景下，因持续受到HBV/HCV感染刺激，形成新的肿瘤（multicentric occurrence，MO型），与原发肿瘤为不克隆来源，即多克隆起源[3]；第三种为以上两种情况兼有之。

克隆起源模式难以通过临床表现和病理的组织形态学判别，即便是在同一个患者中也可能同时存在IM和MO，通过PCR-毛细管电泳法检测肿瘤样本各结节中的10个微卫星位点的长度，能够揭示肿瘤细胞克隆起源的特征[5]。本例中与正常组织相比，5个肿瘤在10个位点中都有缺失，证明在此微卫星区域很有可能存在和肿瘤发生相关的抑癌基因。因此对于多结节性HCC进行克隆起源检测能够对其生物学特性有更加全面的认识。