肖士渝， 周丽雅

北京大学第三医院消化科，北京 100191

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是全球癌症死亡的第三大原因[1]。中晚期胃癌患者即使经过外科手术治疗，5年生存率仍低于30%，这与肿瘤在确诊时已发生局部浸润和远处转移密不可分。目前研究证实，肿瘤局灶代谢微环境紊乱导致的肿瘤细胞外基质(extracellular matrix，ECM)重塑与肿瘤的生长、浸润和转移密切相关[2]，故探究肿瘤微环境对胃癌细胞生物学的影响将有助于找寻新的治疗靶点。

ECM的重塑主要受到基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases， MMPs)和基质金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMP)的调节[3-4]，其中MMPs家族成员中的MMP-2和MMP-9是ECM主要成分Ⅳ型胶原的特异性水解酶。由于肿瘤的快速增殖和新生血管的缺乏，肿瘤微环境呈现一乏营养状态。因此，是否这一代谢应力可通过调控胃癌细胞内MMP-2和MMP-9的表达而引发ECM重塑，目前尚不清楚。此外，在Ⅳ型胶原成分中，脯氨酸和羟脯氨酸占25%[5]，是肿瘤ECM中含量较为丰富的非必需氨基酸。ECM降解产生的脯氨酸是否可作为代谢应力底物支持胃癌细胞在乏营养微环境中的生长需要也不明确,因此，本研究将通过葡萄糖饥饿模拟肿瘤乏营养微环境探究其对胃癌细胞MMP-2、MMP-9表达变化及脯氨酸在乏营养环境下对胃癌细胞活力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料人胃癌AGS、MKN28细胞(国家实验细胞资源共享平台)；胎牛血清(BI)；RPMI-1640培养基(Gbico)；无糖RPMI-1640培养基(Gbico)；质量浓度为10 g/L青-链霉素、质量浓度为2.5 g/L胰酶(Hyclone)；细胞培养皿、6孔/96孔板、离心管(NEST)； RIPA蛋白裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、电泳缓冲液、电转缓冲液、硝酸纤维素膜(NC膜)、脱脂奶粉(北京普利莱基因技术有限公司)；……