一例鸡白痢的实验室诊断及防治

2019-10-23张习本2付登平

贵州畜牧兽医 2019年5期

王蕾，张习本2*，高翔，付登平，杜傲，杨驰

(1.毕节市液氮站，贵州毕节 551700；2.毕节巿畜牧兽医科学研究所，贵州毕节 551700)

鸡白痢是严重危害家禽养殖业的传染病，不同品种、年龄的鸡均可感染，且没有地域限制，给家禽养殖业造成很大的经济损失。雏鸡主要通过种蛋垂直感染，发病率和死亡率均很高；青年鸡一般呈隐性感染，临床症状不明显，死亡率不高[1]。相关调研发现，在贵州省鸡群中，鸡白痢的隐性感染率高达20%～30%，严重危害贵州家禽养殖业发展[2]。现将1例鸡白痢的实验室诊断及防治报道如下，供参考。

1 发病情况及临床症状

2019年5月13日，纳雍县化作乡养殖大户李某求诊，其养殖的1 000只蛋鸡中有40只相继死亡(大多是30日龄左右)，另有220只青年鸡、成年鸡精神不振，鸡冠发白，产蛋率急剧下降。发病率26%(260/1 000)，病死率15.38%(40/260)。临床检查：发现80%病鸡和死亡鸡的肛门被粪便粘结，脚趾充血、肿大。

2 病理变化

解剖病、死鸡10只，发现肝脏肿大，有黄白色坏死点；肺发生明显病变，表面有灰白色坏死点；盲肠增厚且内壁有颗粒状物，触摸有明显黏腻感；卵巢萎缩，输卵管狭小，均有卵黄性腹膜炎。

通过发病情况、临床症状和病理变化初步诊断为疑似鸡白痢。

3 实验室检查

3.1ELISA实验采集病鸡血液50份，8 000 r/min离心取血清，用ELISA血清抗体检测试剂盒(购自广州市益满生物科技有限公司)进行检测。方法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至10 μg/mL，每孔加0.1 mL，4 ℃过夜，次日洗涤3次。加10倍稀释的血清0.1 mL于上述已包被反应孔中，置37 ℃ 孵育1 h，洗涤(同时做空白、阴性、阳性对照)，加入10倍稀释的酶标第二抗体0.1 mL，37 ℃孵育30 min，洗涤，最后1次用超轻水(DDW)洗涤。加入TMB底物溶液0.1 mL，37 ℃孵育30 min，根据试剂盒的配套标准判定结果。结果显示，有48份血清样品鸡白痢抗体呈阳性，阳性率96%。

3.2PCR检测采集病鸡的肝、肺、胃、肠病料组织6份进行PCR分子生物学检测。方法：通过划板、纯化、摇菌等细菌分离方法从病鸡的肝、肺、胃、肠病料组织中提取菌液108CFU/mL，用细菌DNA提取试剂盒[购自天根生化科技(北京)有限公司]提取菌液DNA，并用细菌16S rDNA基因序列测定。采用通用引物：27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492R：5’-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR扩增体系25 μL：mix 13 μL，ddH2O 8 μL，上、下游引物各1 μL，DNA 2 μL。反应条件：95 ℃预变性5 min；94 ℃变性1 min；54 ℃退火45 s；72 ℃延伸1 min，40个循环；72 ℃延伸1 min。扩增产物经1.5% 琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统观察到 1 383 bp 的清晰条带，与预期大小相同(见图1)。将PCR产物送擎科生物技术公司测序，将序列输入GenBank中进行BLAST比对，与已发表序列的基因进行同源性分析，结果显示检测细菌与已发表的沙门氏菌同源性高达98%。遗传进化分析，分离菌与鸡白痢沙门氏菌基因序列亲缘关系最近，确定其为鸡白痢沙门氏菌(见图2)。

图1 分离菌16S rDNA PCR扩增结果M：16S rDNA 通用引物；1：肝脏中提取纯化的细菌；2：肺脏中提取纯化的细菌；3～5：胃组织中提取纯化的细菌；6：肠组织中提取纯化的细菌

图2 分离菌基因序列遗传进化树分析注：★为分离菌

4 诊断

通过临床症状、病理变化、实验室ELISA和PCR检测，确诊为沙门氏菌引起的鸡白痢。

5 治疗

将220只病鸡分为2组(各110只)，一组进行西药治疗，二组进行中药治疗。

5.1 一组用药磺胺嘧啶溶液50 L (0.5 g/L)，鸡群通过自由饮水的方式连续使用3 天。为了防止产生耐药性，3天后更换药物为庆大霉素溶液50 L (0.5 g/L)，鸡群同样通过自由饮水的方式连续服药3天。6天后70%的病鸡症状明显好转，没有出现新的发病症状。对于病情较重的30%病鸡，根据文献资料[3]每天用卡那霉素1 mL/只，分2次肌肉注射，连续用药3天，病情明显好转。

5.2 二组用药根据文献资料[3]按每只鸡10 g的用量取大蒜1 100 g，捣成蒜泥汁，用水稀释成10倍液，按每次0.5 mL/只饮服，每日3次，连续5天。经治疗后病鸡症状均有明显好转，治愈率达90%以上，效果优于西药治疗组。