潘霞 胡盈盈 陈泽宇

摘 要：以浙江省磐安浙贝母（Fritillaria thunbergii Miq.）为研究对象，利用PCR-DGGE技术，研究连作对浙贝母根际土壤细菌群落结构的影响。结果表明，连作条件下浙贝母根际土壤细菌群落结构发生改变，主要表现为细菌种群数量显著减少;但連作年限对浙贝母根际土壤细菌多样性的影响较小，细菌群落结构变化不明显。对浙贝母根际土壤细菌种群的DGGE电泳结果进行主成分分析，分析结果显示，所取浙贝母土壤样品的细菌优势种群为蜡样芽胞杆菌群（Bacillus cereus.Frankland）、芽胞杆菌属（Bacillus Cohn）和鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）。综上表明，浙贝母连作后根际土壤细菌群落结构和功能的改变可能是导致浙贝母连作障碍产生的重要原因之一。

关键词：浙贝母;连作;根际土壤;细菌群落

一、材料与方法

1.实验材料.浙贝母根际土壤样品采自浙江省磐安塘下村种植大田。土壤以红壤为主，浙贝母种植基本为连作种植，除连作年限外土壤处理背景一致。取浙贝母未连作土壤、连作2年土壤、连作多年根际土壤样品。

2.研究方法

（1）取样方法，去除2～3 cm的表层土，完整挖出浙贝母的全部根系，将大块土抖落，取附着在根系上的细土至干净的取样袋中，不同连作年限的浙贝母根际土壤各取三份作为实验组，取未连作土壤三份作为对照。采样后密封保存在4℃冰箱中。

（2）土壤DNA的提取纯化，釆用OMEGA的E.Z.N.A.Soil DNA Kit试剂盒提取浙贝母根际土壤的微生物总DNA。

（3）16S rDNA V3 片段 PCR 扩增。扩增目的DNA为细菌16S部分核糖体核苷酸序列。PCR程序模式为touchdown-PCR程序。反应总体系为ddH2O 17 μL，10×buffer 2.5 μL，dNTP 2 μL，Primer 534 1 μL，Primer 341-GC 1 μL，Ex Tag酶0.5 μL和DNA模板1 μL。……