王警 张雪寒 郭芸芸 张碧成 吴庆侠 何孔旺

摘要：试验针对产类志贺毒素大肠杆菌SLT-IIe初步建立一种猪水肿病大肠杆菌的血清学检测方法。通过原核表达构建出重组崖pET28a-sumo-SLT-IIe/BL21在IPTG诱导下获得表达，表达产物以包涵体形式产生，使用十二烷基肌氨酸钠（SKL）变性的生化提纯步骤获取有生物学活性的重组蛋白。将提取的SLT-He蛋白作为抗原包被ELISA板，初步建立了特异性强的猪水肿病诊断方法，方阵滴定确定抗原最佳包被浓度为2μg/孔，最佳血清稀释浓度是1：25，HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1：15000，5%脱脂奶封闭1h，显色15min。该方法的建立对猪水肿病流行病学调查以及预防和控制该病的发生有重要意义。

关键词：猪水肿病;产类志贺毒素大肠杆菌;SLT-IIe;ELISA

中图分类号：S852.61 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.08.003

0 引言

猪水肿病是仔猪的一种急性致死性传染病，主要由O138、O139等血清型产类志贺毒素大肠杆菌引起的肠毒血症[1]，主要发生于断奶仔猪。发病率通常为10%～35%，病死率高达90%[2]。类志贺毒素Ⅱ型变异体（SLT-IIe）又称猪水肿毒素，是猪水肿病的重要致病因子[3]，其分子结构由1个A亚单位和5个B亚单位组成[4]。

产SLT-IIe大肠杆菌的传统诊断方法是用Vero细胞和小鼠神经毒性试验，并以抗SLT-IIe血清或单克隆抗体做中和试验鉴定，但诊断程序比较繁琐。以SLT-IIe特异性抗体为诊断试剂的ELISA具有高度的特异性[5]。试验通过原核表达SLT-IIe重组蛋白，并以此作为包被抗原建立同时检测SLT-IIe抗体的间接ELISA方法，研制检测SLT的试剂盒。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒及血清

原核表达载体pET28a-sumo（带有11.2kD的sumo标签）、IPTG、猪SLTEC标准阳性血清和阴性血清，均为江苏省农业科学院兽医研究所保存;Sac-1与Bsa-1购自BioLabs;辣根过氧物酶（HRP）标记的羊抗猪IgG购自BETHYL。……