张 燕，王伟红，郝万鹏

(1.乌鲁木齐市第一人民医院检验科，乌鲁木齐 830011；2.乌鲁木齐市温泉康复医院，乌鲁木齐 830017)

亚甲基四氢叶酸还原酶全称为5.10-亚甲基四氨叶酸还原酸酶(methylenetetrarydrofo-late reductase，MTHFR)，为叶酸(folic)与同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代谢通路的关键酶，从而维持了血液中Hcy的浓度；另一方面还参与体内嘌呤、嘧啶的合成及DNA，RNA蛋白质的甲基化。MTHFR基因位点发生突变，其变异直接影响酶的活性，引起MTHFR酶活性下降，使Hcy向蛋氨酸的转化发生障碍，引起高同型半胱氨酸血症。影响叶酸的整个代谢过程。有学者研究报道，rs1801133(C677T)这个位点与人类疾病的关联更为紧密，这个位点的多态性在不同人群、不同种族中的分布不一致，在全球范围内的变异频率较高，不同地区有较大差异[1-2]。还有文献报道，异常的叶酸代谢可能导致引起高同型半胱氨酸血症，从而导致多种疾病的发生。产生胎盘毒性等机制导致不良妊娠结局(包括自然流产、早产、异位妊娠、胚胎停育、死胎、先天性心脏病、出生缺陷等)的发生。MTHFR基因C677T多态性位点可能是导致不良妊娠高风险的因素之一[3]。据此，本文利用2018年1月～2019年1月来本院进行孕前或孕期体检的MTHFR位点TT基因型的育龄妇女作为观察组研究对象。另选择非MTHFR位点TT基因型者的健康育龄妇女作为对照组研究对象，两组研究对象皆在我院产科分娩。研究两组不良妊娠结局的发生频率，同时分析叶酸与Hcy两者浓度的变化及相关性，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2018年1月～2019年1月期间在我院进行孕前与孕期检查且在我院分娩的汉族育龄女性。选择观察组，排除不符合要求、籍贯非本市者，共110例，年龄在20～35岁，平均年龄30.5±5.1岁。全部为MTHFR C677T位点TT基因型。对照组纳入标准：非MTHFRC677T位点TT基因型者，生育史正常，无不良妊娠史及家族性遗传病史，无甲亢及糖尿病等内分泌病史，新生儿健康。年龄在19～34岁之间，平均年龄29.1±4.1岁，在年龄、血压、BMI方面，差异无统计学意义(P>0．05)。在我院进行孕前与孕期检查且在我院分娩的汉族育龄女性118例。进行回顾性研究。

1.2 仪器与试剂 基因测定：PCR基因扩增仪(苏州市天隆科技有限公司)。MTHFRC677T基因检测试剂盒(西安金磁纳米生物技术有限公司)。Hcy测定：全自动生化分析仪(罗氏公司7600型)，试剂盒为北京九强科技有限公司产品。叶酸测定：化学发光分析仪(罗氏公司E602型)，试剂盒为罗氏公司配套产品，批号332978。

1.3 方法

1.3.1 样品收集：对所有受检查者空腹抽取外用静脉血2 ml于EDTA抗凝管，另取5 ml于分离胶采血管。

1.3.2 MTHFRC677T基因检测：检测项目为MTHFRC677T位点。样品为收集的2 ml EDTA抗凝血，通过侧向层析技术实现MTHFRC677T基因多态性的检测。具体参数及操作方法参照PCR扩增仪及试剂盒说明书进行。

1.3.3 血清Hcy测定：将5 ml分离胶采血管离心分离血清，仪器使用罗氏7600全自动生化分析，试剂使用北京九强循环法试剂盒，按照仪器与试剂说明书操作步骤进行Hcy检测。Hcy正常参考范围为5～15 μmol/L。

1.3.4 血清叶酸测定：将测定Hcy分离的血清，使用罗氏E602全自动化学发光分析仪，厂家配套试剂盒(批氏E602号332978)，按照说明书进行操作，正常参考范围为7.5～20.1 μg/L。

1.5 质量控制 所使用仪器每年进行一次计量检测，均须合格。所使用试剂均有注册证。Hcy及叶酸测定参加了国家卫健委临床检验中心室间质评。测定样品时均做室内质控，在控时才可检测。

2 结果

2.1 MTHFRC677T位点TT基因型Hcy与叶酸浓度 见表1。MTHFRC677T位点TT基因型者，叶酸浓度降低，Hcy浓度升高，叶酸与Hcy浓度两组比较，差异均具有统计学意义(P=0.000)。

项 目观察组(n=110)对照组(n=118)t值P值Hcy(μmol/L)叶酸(μg/L)25.9±2.94.9±2.610.5±1.815.5±1.99.8358.3560.0000.000

2.2 MTHFRC677T位点TT基因型不良妊娠结局者与正常人群的比较 在110例TT基因型观察组中，发生不良妊娠结局者21例，发生频率为19.1%，而对照组118例中，发生不良妊娠结局者只有5例，发生频率4.2%。两组数据经计数资料卡方检验，差异均有统计学意义(χ2=29.3，P=0.000)，两组差异具有统计学意义，MTHFRC677T位点TT基因型不良妊娠结局发生频率高于对照组。

2.3 Hcy与叶酸的相关性 见图1。对两组数据进行Pearson相关分析，结果显示Hcy与叶酸呈显著负相关，相关系数r=-0.859，回归方程为：Y=-0.785X+0.913。以叶酸为Y轴，以Hcy为X轴，做散点图，进行相关性分析，两组数据差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 MTHFR基因分布频率及分布特点 乌鲁木齐地区育龄妇女MTHFRC677T位点TT基因型频率为24.5%(110/449)。与相关文献报道[4]的乌鲁木齐地区汉族女性MTHFR677T纯合突变基因型频率24.1%(52/216)相接近。高于惠州(10.9%，39/359)，柳州(9.2%，24/260)等[5，9]地区，差异有统计学意义(χ2=39.3，45.9，均P=0.000)；与银川(23.0%，102/443)，延安(26.7%，403/1 508)，镇江(21.8%，630/2 885)等[6-8]地区比较，差异无统计学意义(χ2=0.18，P=0.983；χ2=5.21，P=0.74；χ2=2.16，P=0.361)。

图1 Hcy与叶酸相关性散点图

3 讨论

3.1 MTHFRC677T基因多态性是第677位点突变，它是目前发现最常见的基因突变位点，该位点的变化是碱基胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置换，这种功能性的突变直接影响MTHFR酶的活性和耐热性。该位点突变有3种基因型：野生型CC，杂合突变型CT，纯合突变型TT。TT型的活性仅为CC型的30%，加热5 min后，CT型酶活性为56%，而TT型酶活性仅为22%， CC型作为对照组剩余酶活性为67%[1]。中国汉族人群C677T的突变频率为40%，MTHFRC677C等位基因频率分布呈现地理梯度，突变频率随着纬度的增加先增加再减少。TT型基因频率在南方地区为6.6%，中部地区为14.2%，北部地区为21.3%，最北部地区为15%。MTHFR位点的多态性可能会引发孕妇妊娠高血压，而且与不明原因反复自然流产也有关(TT型基因)，也增加胎儿心脏畸形的发生率，同时增加伴随先天性心脏病的先天愚型(也称唐氏综合征)患儿的出生率。也是引起流产或使胎儿生长受限等的原因。由于与孕妇疾病及出生缺陷的相关性，MTHFR位点已被列入计划生育常规体检项目，女性在怀孕期间最好进行“孕期叶酸需求”基因检测。

3.2 叶酸是合成核酸必不可少的元素之一，但是不能在人体内合成，因此必须从外界获取。叶酸代谢是一个复杂的生化过程。在叶酸代谢过程中，涉及到的一些酶具有多态性。由于个体遗传差异因素的存在，MTHFR基因发生突变者，就导致对叶酸的利用率降低，使孕妇补充等量叶酸后，但是体内的叶酸活性存在差异。研究表明，MTHFR基因多态性是叶酸代谢障碍发生的重要因素[10]。

3.3 Hcy是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的一个中间产物，损伤血管内皮细胞。血清Hcy水平亦是心脑血管疾病的独立危险因素。高同型半胱氨酸血症严重影响血管增殖和相应的修复功能，从而引发孕妇体内胎儿发生血管病变和凝血系统障碍等，故必须保持体内Hcy浓度处于平衡状态。叶酸代谢相关酶活性正常，才能维持体内Hcy水平。影响Hcy代谢的因素主要有环境和遗传两个方面。遗传因素方面，有文献报道，MTHFR基因的677位点突变后，血清中Hcy浓度会显著升高。在MTHFR患者中，带有TT基因型的患者血清中Hcy浓度明显高于CC基因型患者。孕妇检测MTHFR基因C677T位点基因型，并结合血清Hcy浓度测定，有助于预防出生缺陷的发生。