杨勇波，伍 玲

(1.重庆市开州区人民医院 肿瘤科,重庆405400;2.重庆市开州区中医院 妇产科)

卵巢癌是死亡率处于首位的妇科恶性肿瘤疾病[1]，患者早期临床症状及体征较为隐匿，极易出现淋巴结或其他脏器组织转移及播散等现象，导致患者预后极差。上述恶性生物学行为与肿瘤的特殊物质、能量生理代谢之间存在密切的联系，而脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)是在其中起到重要作用的功能蛋白酶，其不但可调节物质、能量生理代谢过程，还可调节细胞内信号分子的转导，在较多恶性肿瘤组织中呈异常表达现象，与肿瘤疾病的发生、发展有着密切的相关性[2]。有研究证实[3]，FASN基因在卵巢癌发生、进展中也发挥着重要的作用，但何种作用机制使得FASN基因出现异常表达目前仍未研究清楚。近些年国外关于结直肠癌的实验研究发现[4]，FASN可通过改变血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)分泌及生物学活性功能而调节肿瘤组织中的新生血管形成。FASN在卵巢癌中是否也有存在上述情况目前尚无相关文献报道，因此本研究拟观察FASN、VEGF和MMP-9在卵巢癌组织及外周血中的表达，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择本院肿瘤科、妇产科2016年2月-2018年5月期间住院治疗的110例患者作为研究对象，术后经病理组织检查均已确诊，所有患者手术治疗前均未经任何治疗，其中卵巢癌患者38例，平均年龄为(48.4±6.3)岁；卵巢良性肿瘤患者40例，平均年龄为(47.7±7.1)岁；因子宫良性病理改变而实施卵巢切除治疗的患者32例，平均年龄为(48.1±7.8)岁。各组患者年龄经统计学分析比较无显著性差异(P>0.05)，所有患者均知晓研究内容并签署知情同意书，本课题已获得医院伦理委员会审核及批准。

1.2 实验试剂

兔抗人FASN、VEGF、MMP-9单克隆抗体均购自美国Santa公司，免疫组织化学试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司，DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司，血清FASN酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒购自北京华夏远洋科技有限公司，血清VEGF、MMP-9 ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。

1.3 实验检测方法

1.3.1FASN、VEGF和MMP-9蛋白表达检测 术后收集各组患者新鲜卵巢癌或卵巢组织标本，经常规石蜡包埋切片处理后采用免疫组织化学法检测FASN、VEGF和MMP-9蛋白在组织中的表达水平，由专人根据试剂盒说明书进行操作，以PBS溶液替代一抗作为阴性对照，以乳腺癌组织作为阳性对照。细胞核或细胞质染色后表现为棕褐色颗粒则认定为检测结果阳性，在显微镜高倍视野(×400)下随机选择5个视野，阳性细胞数所占比例根据<5%、5%-30%、31%-70%、>70%计为0、1、2、3分，染色强度根据无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色计为0、1、2、3分，两者计分相加所得总分>3分则视为阳性表达，分别由两名本院工作经验丰富的病理医师独立阅片予以判读。

1.3.2血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平检测 术前在清晨空腹状态下抽取各组患者肘部血液5 ml，离心处理10 min后留取上层血清，采用ELISA法检测各组血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平，由专人根据试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学分析

采用统计学软件SPSS 19.0对本研究数据进行处理，各组阳性表达率比较采用χ2检验，各组血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平比较采用方差分析及两两比较，各指标之间相关性关系采用Spearman法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组FASN、VEGF和MMP-9蛋白表达水平比较

FASN、VEGF和MMP-9蛋白在对照组、卵巢良性病变组及卵巢癌组中的阳性表达率比较均存在显著性差异(P<0.05)，卵巢癌组和卵巢良性病变组各指标阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)，且卵巢癌组各指标阳性表达率明显高于卵巢良性病变组(P<0.05)，见表1及图1。

表1 各组FASN、VEGF和MMP-9蛋白表达水平比较 [n(%)]

注：与对照组比较，*P<0.05；卵巢癌组与卵巢良性病变组比较，#P<0.05。

A：正常卵巢组织；B：卵巢良性肿瘤组织；C：卵巢癌组织1：FASN；2：VEGF；3：MMP-9注：FASN、VEGF、MMP-9蛋白均表达在细胞浆内

2.2 各组血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平比较

各组血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平比较均存在显著性差异(P<0.05)，卵巢癌组和卵巢良性病变组各指标表达水平均明显高于对照组(P<0.05)，且卵巢癌组各指标表达水平明显高于卵巢良性病变组(P<0.05)，见表2。

表2 各组血清FASN、VEGF和MMP-9表达水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；卵巢癌组与卵巢良性病变组比较，#P<0.05。

2.3 FASN与VEGF、MMP-9的相关性分析

采用Spearman法分析，卵巢癌患者病灶组织中FASN与VEGF、MMP-9呈正相关性关系(r=0.625，0.577，P<0.05)，血清中FASN与VEGF、MMP-9也呈正相关性关系(r=0.684，0.608，P<0.05)。

3 讨论

恶性肿瘤病灶组织或细胞出现周围组织侵袭和淋巴结转移是卵巢癌重要的临床特征，也是导致卵巢癌患者放化疗效果不佳以及最终死亡的重要原因，上述生物学行为是依赖较多介质因子的步骤过程，尤其以VEGF和MMP-9起到的作用最为重要[5]。MMP-9属于基质金属蛋白酶家族成员，可有效降解血管基底膜以及其他细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分，使得毛细血管更容易形成血管腔解剖结构，也有助于VEGF顺利转移至血管内皮细胞和血管基底膜表面，从而明显促进内皮细胞的分裂过程，显著性增加毛细血管的通透性，增强内皮细胞增殖生长和迁移等生物学功能，最终导致新生血管在肿瘤病灶组织内的大量形成[6,7]。同时VEGF还可明显提高整合素在内皮细胞以及恶性肿瘤细胞上的表达水平，有助于恶性肿瘤细胞出现迁移、黏附和浸润等恶性生物学行为[8]。此外，国外研究还发现[9]，VEGF可间接促进MMP-9的合成分泌，并明显增加后者的生物学活性功能。本研究显示，卵巢癌患者组织及血清VEGF、MMP-9水平均明显高于卵巢良性病变患者及对照组，提示VEGF和MMP-9在卵巢癌发生、发展过程中起着相互协同的作用，共同促进新生血管组织的形成、增强肿瘤细胞的浸润和转移等生物学功能。

肿瘤细胞还具有重新编程能量生理代谢等特征性行为，不管是处于有氧微环境状态或是缺氧微环境状态，其更易将大量葡萄糖代谢成为乳酸，进而通过增强脂肪酸氧化磷酸化生物学途径进行物质合成、能量产生，最终在肿瘤发生、发展过程中起到重要作用[10]。一般情况下，正常细胞倾向于摄取外源性脂肪酸，而肿瘤细胞则主要摄取内源性脂肪酸，并以脂滴形式将脂肪酸予以大量储存[11]。正常人体可通过日常饮食获取脂肪酸，故组织或血清中FASN不表达或呈低表达现象，而肿瘤组织对内源性脂肪酸的需求量较多，因此在结直肠癌、胰腺癌等多种类型恶性肿瘤病灶组织中均可见FASN过表达现象[12,13]。本研究也发现，卵巢癌患者组织及血清FASN水平明显高于卵巢良性病变患者及对照组，与上述研究一致。相关研究还发现[14-16]，FASN表达水平过高预示着较多肿瘤患者预后情况不佳。目前研究证实[17]，FASN在卵巢癌发生、发展过程以及周围组织侵袭、淋巴结转移等多方面有着重要作用，但关于FASN过表达的机制研究极为复杂，主要为转录水平、翻译后水平及微环境切应力等方面[18]。本研究显示卵巢癌患者病灶组织及血清中FASN与VEGF、MMP-9均呈正相关性关系(P<0.05)，提示FASN可能通过增强VEGF、MMP-9表达而在卵巢癌发生、发展中发挥着重要的作用。FASN作为在细胞脂质生理代谢过程中起着重要作用的一种酶，有希望成为临床早期诊断卵巢癌的实验室标志物和新的治疗靶点。