章佳斌，卢晓文，罗少杰，焦 钰，邓岳文,2

马氏珠母贝DNA甲基化转移酶的克隆及表达

章佳斌1，卢晓文1，罗少杰1，焦 钰1，邓岳文1,2

(1. 广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524088；2. 广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心，广东 湛江，524025）

对马氏珠母贝（）DNA甲基化转移酶1（DNA methyltransferase 1，Dnmt1）的基因全长及组织表达作分析，探究马氏珠母贝甲基转移酶Dnmt1（）参与贝壳矿化调控机理。利用RACE技术获得的cDNA序列全长，并对的序列特征进行分析，同时利用逆转录-聚合酶链反应RT-PCR技术检测马氏珠母贝不同组织中的表达情况。基因cDNA长4 818 bp，其中，开放阅读框为4 623 bp，编码1 540个氨基酸。预测分子质量约为174.55 ku、理论等电点为5.89。结构域分析显示，PmDnmt1具有DMAP 结合结构域、DNMT1-RFD结构域、锌指结构、BAH结构域和C5胞嘧啶DNA甲基化酶结构域等。多序列比对结果发现，Dnmt1在不同物种间具有较高保守性。实时荧光定量PCR分析显示在所有检测组织中均有表达，在外套膜中央膜部分的表达量最高（< 0.05）。可通过调控外套膜的DNA甲基化修饰参与贝壳的形成。

马氏珠母贝；DNA甲基化转移酶；基因克隆；表达模式

DNA甲基化是目前在表观遗传学中研究最为成熟的一种表观遗传修饰，能够引起DNA稳定性、构象、染色体结构等多方面的改变，在调控基因表达[1]、维持染色体结构[2]以及基因印迹[3]等方面扮演着重要角色。通常来说，DNA甲基化是由甲基转移酶（DNA methyltransferase，Dnmt）起介导作用，并利用腺苷酰--甲硫氨酸（SAM）为甲基供体，将胞嘧啶（C）转变为5-甲基胞嘧啶（5mC）[4]。哺乳动物中，3种DNA甲基转移酶（Dnmt1、Dnmt2和Dnmt3）参与到DNA的甲基化修饰中。Dnmt3分为Dnmt3a和Dnmt3b两种，能够识别半甲基化和未甲基化序列，与DNA序列的从头甲基化有关；……