吴凤雷，黄瑜，黄郁葱，蔡双虎，简纪常，汤菊芬

罗湖病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

吴凤雷，黄瑜，黄郁葱，蔡双虎，简纪常，汤菊芬

（广东海洋大学水产学院, 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室，广东 湛江 524088）

【】建立一种快速、灵敏、特异的罗非鱼（spp）罗湖病毒定量检测方法。根据罗湖病毒节段8保守区设计一对特异性引物，建立检测罗湖病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法，并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评价。标准曲线在2.5×108～2.5×100拷贝数之间有良好的线性关系（相关系数2= 0.999），检测限为2.5×100个拷贝。试验内及试验间变异系数分别为0.11%～0.43%与0.54%～1.13%，重复性强；对水生动物其他病毒和细菌均无扩增反应，有很好的特异性。新建立的罗湖病毒实时荧光定量PCR检测方法特异性好、灵敏度高、重复性强，可用于TiLV的早期的快速诊断、流行病学调查和防控。

罗非鱼；罗湖病毒；检测；实时荧光定量RT-PCR；标准曲线

尼罗罗非鱼（）又称白色三文鱼，是全球重要淡水养殖经济鱼种之一，有繁殖力强、生长速度快、产量高和抗病力强等优点[1]，是联合国粮食及农业组织（FAO）推荐养殖鱼种。近年来，以色列、厄瓜多尔、哥伦比亚、泰国和埃及等国及中国台湾养殖和野生的罗非鱼相继暴发一种新病害[2-4]，导致巨大的经济损失，引起国际上的广泛关注。该病主要症状为病鱼消瘦，体色发黑，眼球突出浑浊，体表充血、溃烂，腹部膨胀有积水。……