马少鸿，黄郁葱，简纪常，蔡双虎

哈维氏弧菌基因的克隆及原核表达分析

马少鸿，黄郁葱，简纪常，蔡双虎

（广东海洋大学水产学院 // 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088）

【】对哈维氏弧菌（）ZJ0603的基因进行克隆与原核表达分析，优化表达条件。克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的基因，对其编码蛋白进行理化性质、信号肽、亚细胞定位、二级结构及三级结构分析，构建表达载体pET28a-，经HI和I双酶切和测序鉴定正确后转入表达菌株大肠杆菌BL21，对表达重组菌株进行表达条件优化及Western Blot鉴定。基因的开放阅读框（ORF）全长为1 179 bp，编码336个氨基酸，分子质量为38.04 ku，理论等电点5.27，不稳定系数41.97，总平均亲水性-0.382，PspF蛋白整体表现为亲水性蛋白。成功构建含pET28a-的表达菌株，其最佳诱导条件为37 ℃下异丙基---硫代半乳糖苷（IPTG） 0.2 mmol/L诱导6 h，其表达蛋白为38 ku。Western Blot结果表明PspF重组蛋白成功获得，蛋白同源性高，具有作为抗弧菌病疫苗的潜力。

哈维氏弧菌；基因；原核表达；表达优化

哈维氏弧菌（）是一种主要分布于海洋的革兰阴性菌，兼性厌氧，嗜盐，是多种海水动物的常见致病菌[1]，其在适宜温度下可快速生长繁殖为优势菌种，通过口、鳃及体表等途径侵染养殖动物[2]，致使养殖动物大批量死亡，在大西洋棘白鲳（）[3]、对虾（）[4]、石斑鱼（sp）[5]、大黄鱼（）[6]和线纹海马（）[7]等多种养殖经济动物都爆发过大规模弧菌病，严重危害海水养殖业的发展。

PspF蛋白为噬菌体休克蛋白（Phage shock protein）操纵子转录激活因子，其能激活噬菌体休克蛋白系统表达[8]。噬菌……