□ 翟崇华 玉溪市质量技术监督综合检测中心

材料与方法

仪器

①日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪（带紫外检测器）；②AS-A型系列超声波清洗器（天津奥特赛恩斯化器有限公司）；③超纯水机（台湾艾柯仪器公司）；④分析天平，感量0.1 mg；⑤恒温水浴锅；⑥匀浆机。

试剂

①安赛蜜：浓度1.00 mg/mL（国家标准物质中心）；②苯甲酸：浓度1.00 mg/mL（国家标准物质中心）；③山梨酸：浓度1.00 mg/mL（国家标准物质中心）；④糖精钠：浓度1.00 mg/mL（国家标准物质中心）；⑤甲醇（色谱纯）；⑥氨水（分析纯）；⑦无水乙醇（分析纯）；⑧正己烷（分析纯）。

试剂配制

（1）脱氢乙酸（98.0%）储备液。用10 mL20 g/L的碳酸氢钠溶液溶解，加水配制成1.00 mg/mL标准储备液。

（2）0.02 mol/L乙酸铵溶液。称取1.54 g优级纯乙酸铵用水溶解后定容至1 000 mL，经 0 .45μm水系滤膜用真空泵抽滤。

（3）220 g/L乙酸锌溶液。称取220 g分析纯乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至1 000 mL。

（4）106 g/L亚铁氰化钾溶液。称取106 g分析纯亚铁氰化钾用水溶解后定容至1 000 mL。

（5）20 g/L碳酸氢钠溶液。称取20 g分析纯碳酸氢钠用水溶解后定容至1 000 mL。

（6）氨水溶液（1+99）。取氨水1 mL，加99 mL水中，混匀。

实验方案

色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS 5μm,4.6 mm×150 mm（日本岛津），流动相：甲醇+乙酸铵=10+90，总流速1.00 mL/min，柱压20 MPa，柱温40 ℃，检测波长230 nm，进样体积10μL,采集时间15 min。

检测部分

标准溶液的配制

分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸标准储备液（1 000 mg/L）各10 mL于50 mL容量瓶中，用水定容成混合标准中间溶液（200 mg/L）。分别吸取混合标准中间溶液0.0、0.05、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00 mL及 10.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，成质量浓度分别为0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100 mg/L及 200 mg/L，经 0 .45μm水系滤头过滤后上机检测，绘制标准曲线。

试样制备

取多个预包装的饮料、液体奶等均匀样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力在50～60 ℃下加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取其中的200 g装入玻璃容器中，密封，液体试样及不能常温存放的于4 ℃下保存。

试样提取

（1）一般性试样。精确称取5～10 g样品于100 mL比色管中，加入50 mL水，摇匀浸泡30 min。

（2）含胶基的果冻、糖果等试样。精确称取5 g试样于100 mL比色管中，加入50 mL水，超声混匀，于70 ℃水浴加热溶解试样，超声处理20 min。

（3）脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样。精确称取5 g试样于100 mL比色管中，加正己烷10 mL，于60 ℃水浴加热约5 min，轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50 mL，无水乙醇2 mL，摇匀，超声处理20 min，弃去有机相，水相转移至100 mL比色管中。

样品测定

分别在上述处理试样中各加入5 mL乙酸锌和亚铁氰化钾溶液，摇匀定容至100 mL，静置沉降，取上层清液1 mL经 0 .45μm水系滤头过滤后上机检测，采用外标准与标准曲线比较定量。待测样液待测组分浓度应在标准曲线线性范围内，超出线性范围则应稀释后再进样分析。

结果计算

样中待测组分含量的计算公式如式（1）所示。

式（1）中：X试样中待测组分含量，单位为g/kg；c-由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，单位为mg/L；V-试样定容体积，单位为mL；m-试样质量，单位为g；1 000-由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

结果与讨论

称取样品应根据待测组分含量计算取样量。确保待测组分浓度保持在标准曲线线性范围内，若检测后超出线性范围则应稀释后再进样分析。

试样处理时注意：酱油、食醋、碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。

食品中这5个项目有3个国家标准，本人经过实际操作整合为一个检测方法一起检测5个项目。当然色谱柱的选择很关键，色谱柱选择不当，就不能一起检测5个项目。

以上内容对食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸含量测定，采用国家标准需要分3次检测，费时费力，成本高，5个项目同时测定的高效液相色谱法非常有实用价值，试样前处理简单，定量测定的灵敏度和准确度高，完全能满足三个国家标准要求（GB5009.28-2016、GB5009.121-2016、GB/T5009.140-2003），非常值得本专业人士参考。