楼一波, 王晓华, 傅志成

楼一波, 王晓华, 义乌市中心医院急诊科 浙江省义乌市 322000

傅志成, 义乌市中心医院消化科 浙江省义乌市 322000

核心提要: 本研究采用雨蛙肽处理AR42J细胞构建急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)细胞模型,分析miR-7a-5p对胰腺炎细胞增殖及凋亡的影响,初步验证其作用靶基因,为揭示AP发病机制及治疗方法奠定理论基础.

0 引言

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是临床常见疾病,胰腺腺泡细胞增殖及凋亡与AP发生及发展密切相关[1-3].因而寻找与胰腺腺泡细胞增殖及凋亡相关的分子标志物对临床诊断及治疗AP具有重要意义. 微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p, miR-7a-5p)表达异常与缺血性脑损伤密切相关, miR-7在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)和轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis, MAP)患者血清中呈高表达[4,5]. 活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1,PIAS1)在AP腺泡细胞中呈低表达[6]. 雨蛙肽可刺激胆囊收缩及胰酶分泌并可促使胰腺腺泡细胞凋亡导致组织损伤[7]. 但关于miR-7a-5p在AP中的表达及其对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响尚未见报道. 因此, 本研究采用雨蛙肽处理AR42J细胞构建AP细胞模型, 分析沉默miR-7a-5p表达及PIAS1过表达对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响, 为临床治疗AP及基础研究提供理论依据.

1 材料和方法

1.1 材料 大鼠胰腺AR42J腺泡细胞购自中国科学院上海细胞库. 雨蛙肽购自美国Sigma公司; 胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、RPMI1640培养基、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline, PBS)及青链霉素均购自美国Gibco公司; Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒、Trizol试剂及Lipofectamine2000转染试剂均购自美国Invitrogen公司; PVDF膜购自美国Millipore公司; 兔抗鼠GAPDH抗体、PIAS1抗体及辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的IgG二……