郑晓辉，徐淑娟，黄家福，林振兴， 祝珊珊，许雅苹，马丽娟，黄黎月

(1. 厦门医学院机能与临床转化福建省高校重点实验室,福建 厦门 361023；2. 福建医科大学附属协和医院血液科,福建福州 350001；3. 南方医科大学南方医院血液科，广东 广州 511436; 4. 厦门医学院科学实验中心,福建 厦门 361023)

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是具有明显遗传异质性的临床侵袭性疾病。靶向异常基因治疗是当前研究热点。黏附调节分子1(adhesion regulating molecule 1，ADRM1)亦被称为 hRpnl3(human Rpn13)，是26S蛋白酶体亚单位19S调节颗粒上两个主要泛素受体之一，决定26S蛋白酶体结构不对称性。该蛋白在多细胞真核生物内高度保守，在生命过程中可能发挥重要功能。有研究表明[1-3]，ADRM1在肝癌、胃癌、急性白血病等多种恶性肿瘤中过表达，下调ADRM1蛋白水平可明显抑制肿瘤细胞增殖，促进其凋亡。因此，ADRM1可能成为肿瘤治疗靶点。

双亚苄基哌啶RA190是近几年研究发现的ADRM1抑制剂，通过与ADRM1的半胱氨酸88共价结合，抑制蛋白酶功能[4]。本实验拟通过检测不同浓度RA190作用下HL60细胞活率，分析细胞周期与凋亡及ADRM1蛋白水平，以了解RA190在AML中作用机制，为AML治疗采用靶向ADRM1策略提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料人急性粒细胞白血病部分分化型细胞HL60为本实验室保存。RA190(MCE)；PI(KeyGEN Biotech)；Annexin V FLUOS Staining Kit(Roche)；Western blot抗体(CST公司)；RPMI 1640培养基(Corning)；胎牛血清(Gemini)。流式细胞仪EPICSXL(BECKMAN COULTER)。

1.2 方法

1.2.1细胞毒性实验 设不同浓度RA190(终浓度0.5、1、2、4 μmol·L-1)实验组和空白对照组，采用台盼蓝拒染法于细胞自动计数板上计数。

1.2.2流式细胞术检测细胞周期与凋亡 设不同浓度RA190实验组(0.5、1 μmol·L-1)和空白对照组，按照PI及Annexin V FLUOS Staining Kit试剂盒说明书操作。

1.2.3Western blot检……