梁惠珍 靳贝贝 裴香萍 门九章 李慧 魏金娜

中圖分类号 R927.2;R932 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）17-2365-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.17.12

摘 要 目的：考察门氏护胃方中连翘单药及与其他药材配伍煎煮前后连翘酯苷A和连翘苷提取率的变化。方法：采用高效液相色谱法测定连翘单味药材（5 g×7付）、连翘（5 g×7付）与姜半夏配伍、门氏护胃方[包括连翘（5 g×7付）、姜半夏等6味药材]经水煎煮后药液中连翘酯苷A和连翘苷的提取量并计算提取率。色谱柱为 Diamonsil C18，流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱，检测波长为278 nm，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL/min。结果：连翘酯苷A与连翘苷进样量线性范围分别为0.61～6.1、0.246～2.46 μg（r=0.999 7、0.999 9），在精密度、稳定性（20 h内）和重复性试验中RSD均<2%（n=6），平均回收率为96.10%～99.37%（RSD≤2.36%，n=6）;在连翘单味药材中，连翘酯苷A和连翘苷的提取率分别为96.90%、66.67%;在连翘-姜半夏配伍样品水煎液中，二者的提取率分别为101.61%、54.55%;在门氏护胃方样品水煎液中，二者的提取率分别为98.39%、84.85%。结论：连翘与姜半夏配伍后连翘酯苷A的提取率增加、连翘苷的提取率略有减少;连翘与门氏护胃方中其他药材配伍后，二者的提取率均略有增加。

关键词 门氏护胃方;连翘酯苷A;连翘苷;配伍;含量测定;高效液相色谱法

Study on Changes of Extraction Rates of Forsythiaside A and Forsythin in Forsythia suspense Compatible with Other Medicinal Materials of Menshi Huwei Formula before and after Decoction

LIANG Huizhen1，JIN Beibei1，PEI Xiangping1，MEN Jiuzhang2，LI Hui3，WEI Jinna4（1.College of TCM， Shanxi University of TCM， Shanxi Jinzhong 030619， China;2.Clinical College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Shanxi University of TCM， Shanxi Jinzhong 030619， China;3.College of TCM， Heilongjiang University of TCM， Harbin 150040， China;4.College of TCM， Tianjin University of TCM， Tianjin 301617， China）

ABSTRACT   OBJECTIVE： To investigate the changes of extraction rates of forsythiaside A and forsythin in Forsythia suspensa compatible with other medicinal material of Menshi huwei formula before and after decoction. METHODS： HPLC method was used to determine the extraction amounts and to calculate the extraction rates of forsythiaside A and forsythin in F. suspensa （5 g×7 doses）， F. suspensa （5 g×7 doses） compatible with Pinelliae rhizoma praeparatum cum zingibere et alumine （PRZA）， Menshi huwei formula [including 6 ingredients as F. suspense （5 g×7 doses）， PRZA] after decocted with water. The determination was performed on Diamonsil C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% formic acid solution （gradient elution）. The detection wavelength was set at 278 nm， and the column temperature was 30 ℃. The flow rate was 1.0 mL/min. RESULTS： The linear range of forsythiaside A and forsythin were 0.61-6.1， 0.246-2.46 μg （r=0.999 7， 0.999 9）， respectively; RSDs of precision， stability （within 20 h） and reproducibility tests were all lower than 2% （n=6）. Average recovery rates were 96.10%-99.37% （RSD≤2.36%，n=6） respectively. In F. suspensa， extraction rates of forsythiaside A and forsythin were 96.90% and 66.67%. In F. suspensa compatible with PRZA， extraction rates of them were 101.61% and 54.55%. In Menshi huwei formula， extraction rates of them were 98.39% and 84.85%. CONCLUSIONS： After F. suspensa is compatible with PRZA， the extraction rates of forsythiaside A is increased while forsythin is decreased. After compatible with other medicinal material in Menshi huwei formula， extraction rates of both are increased slightly.

KEYWORDS   Menshi huwei formula; Forsythiaside A; Forsythin; Compatibility; Content determination; HPLC

门氏护胃方是山西首届名医门九章教授的经验方，由人参、连翘、炙甘草、姜半夏等药味组成，具有温中止呕、补脾散寒的功效，用于治疗癌症患者，特别是呕吐严重的癌症患者放化疗后的胃肠道反应。方中连翘和姜半夏均具有止呕的作用，在该方中起着举足轻重的作用。连翘味苦，性微寒[1-2]，其止呕之功，在我国古代本草及医学专著中均无记载，而有文献报道其首见于日本的《皇汉医学》中[3-4]。现代实验证明，连翘对多种原因导致的恶心呕吐均具有很好的抑制作用，如抑制化疗引起的呕吐，减少呕吐次数[5]，还能抑制家犬皮下注射阿扑吗啡引起的呕吐以及顺铂所致的模型水貂的呕吐[6]。姜半夏的镇吐作用已有研究证实其水煎液能减少顺铂所致呕吐、阿扑吗啡所致呕吐、洋地黄所致呕吐等[7-8]。连翘酯苷A和连翘苷是连翘的主要有效成分，具有抗炎[9-13]、抗氧化[9，14]等药理作用，虽然尚无文献报道二者具有止呕作用，但其抗炎作用可能与连翘的止呕之功有着密切的关系[15]。由于相关研究较少，故本文设计试验，采用高效液相色谱法测定在门氏护胃方的复方配伍中，以及连翘与姜半夏配伍前后，煎煮液中连翘酯苷A和连翘苷提取率的变化，旨在研究该制剂中具有止呕作用的中药配伍前后有效成分的变化情况，以探索门氏护胃方配方的合理性。

1 材料

1.1 仪器

Waters-e2695高效液相色谱仪，包括四元泵洗脱系统、自动进样系统、2998光电二极管矩阵检测器（PDA）及柱温箱（美国Waters公司）;SB-5200 DTDN超声波清洗器（宁波新芝生物科技有限公司）;AB-135十万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;500g-11005托盘天平（慈溪市华徐衡器实业有限公司）;FA/JA1004万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司）;HH-2数显恒温水浴锅（金坛市杰瑞尔电器有限公司）;FW100高速万能粉碎机（北京市永光明医疗仪器有限公司）;DHG-9075A电热鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）;万用电炉（北京科伟永兴仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

人参（批号：20160601）、炙甘草（批号：20160401）、连翘（批号：20140210）、姜半夏（批号：20171101）、干姜（批号：20160801）、白术（批号：20160301）等药材饮片均来源于福建承天药业有限公司，经山西中医药大学中药学院中药鉴定教研室主任裴香萍副教授分别鉴定为五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根茎、豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）的干燥根莖、木犀科植物连翘[Forsythia suspensa（Thunb.）Vah]的干燥果实、天南星科植物半夏[Pinellia ternata（Thunb.）Breit.]的干燥块茎、姜科植物姜（Zingiber officinale Rosc.）的干燥根茎、菊科植物白术（Atractylodes macrocephala Koidz.）的干燥根茎。

连翘酯苷A对照品（批号：111810-201606，纯度：≥98%）、连翘苷对照品（批号：110821-201615，纯度：≥98%）均购自中国食品药品检定研究院;乙腈为色谱纯;水为娃哈哈纯净水;甲醇、甲酸均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的制备

2.1.1 连翘单药样品粉末的制备 取连翘药材7付量，共35 g，加10倍量的水煎煮30 min，滤过，药渣再加8倍量水煎煮25 min，滤过，合并两次滤液，浓缩至稠膏状，置于60 ℃烘箱中，烘干，即得。

2.1.2 连翘-姜半夏配伍样品粉末的制备 取连翘和姜半夏药材7付量（连翘5 g，姜半夏9 g），共98 g，按照连翘单药样品的制备方法制备，即得。

2.1.3 门氏护胃方复方样品粉末的制备 取门氏护胃方复方药材7付量（人参6 g，干姜4 g，白术12 g，姜半夏9 g，连翘5 g，炙甘草6 g），共294 g，按照连翘单药样品的制备方法制备，即得。

2.1.4 连翘阴性样品Ⅰ粉末的制备 取姜半夏药材7付量，共63 g，按照连翘单药样品的制备方法制备，即得。

2.1.5 连翘阴性样品Ⅱ粉末的制备 取缺连翘的门氏护胃方复方药材7付量（人参6 g，干姜4 g，白术12 g，姜半夏9 g，炙甘草6 g），共259 g，按照连翘单药样品的制备方法制备，即得。

2.1.6 连翘和姜半夏双阴性样品粉末的制备 取缺连翘和姜半夏的门氏护胃方复方药材7付量（人参6 g，干姜4 g，白术12 g，炙甘草6 g），共196 g，按照连翘单药样品的制备方法制备，即得。

2.2 含量测定方法

2.2.1 混合对照品贮备溶液的制备 精密称取连翘酯苷A对照品15.25 mg、连翘苷对照品6.15 mg至10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 （1）供试品溶液Ⅰ的制备。取连翘单药样品粉末0.3 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min（功率：200 W，频率：50 kHz），放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（2）供试品溶液Ⅱ的制备。取连翘-姜半夏配伍样品粉末1.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。（3）供试品溶液Ⅲ的制备。取门氏护胃方复方样品粉末3.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 （1）阴性样品溶液Ⅰ的制备。取连翘阴性样品Ⅰ粉末0.7 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。（2）阴性样品溶液Ⅱ的制备。取连翘阴性样品Ⅱ粉末3.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。（3）双阴性样品溶液的制备。取连翘和姜半夏双阴性样品粉末3.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。

2.2.4 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为278 nm;柱温为30 ℃;进样量为10或20 μL。梯度洗脱程序见表1。

精密吸取混合对照品贮備溶液10 μL，供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及阴性样品溶液Ⅰ、Ⅱ和双阴性样品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，结果阴性样品溶液对主要成分峰均未见干扰。理论板数按连翘酯苷A、连翘苷峰计应分别不低于5 000、3 000。色谱图见图1。

2.2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下的混合对照品贮备溶液0.2、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mL，置于5 mL量瓶中，分别制备成连翘酯苷A为0.061 0、0.152 5、0.244 0、0.305 0、0.457 5、0.610 0 mg/mL，连翘苷为0.024 6、0.061 5、0.098 4、0.123 0、0.184 5、0.246 0 mg/mL的对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，测定并记录其峰面积。以连翘酯苷A（A）和连翘苷（B）进样量（μg）为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，得回归方程分别为yA=856 479xA+103 552、yB=71 392xB+12 997，相关系数分别为rA=0.999 7、rB=0.999 9，表明连翘酯苷A进样量线性范围为0.61～6.1 μg，连翘苷进样量线性范围为0.246～2.46 μg。

2.2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品贮备溶液10 μL，重复进样6次，记录峰面积。结果，连翘酯苷A和连翘苷峰面积的RSD分别为0.47%、1.45%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分别在0、4、8、12、16、20 h进样，分别测定，记录峰面积。结果，供试品溶液Ⅰ中的连翘酯苷A和连翘苷峰面积的RSD分别为0.72%、0.56%（n=6）;供试品溶液Ⅱ中二者的峰面积的RSD分别为0.33%、1.73%（n=6），供试品溶液Ⅲ中二者的峰面积的RSD分别为0.88%、0.51%（n=6），表明供试品溶液中连翘酯苷A和连翘苷在20 h内稳定性良好。

2.2.8 重复性试验 取连翘单药样品粉末0.3 g，连翘-姜半夏配伍样品粉末1.0 g，门氏护胃方复方样品粉末3.0 g，各6份，精密称定，分别按供试品溶液Ⅰ制备方法制备，测定，计算含量。结果，连翘酯苷A和连翘苷在连翘单药样品中平均含量分别为54.95、7.72 mg/g，RSD分别为1.04%、0.40%（n=6）;在连翘-姜半夏配伍样品中，二者的平均含量分别为17.86、1.97 mg/g，RSD分别为0.98%、0.91%（n=6）;在复方样品中，二者平均含量分别为5.70、0.84 mg/g，RSD分别为1.53%、0.88%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 取连翘单药样品粉末0.15 g、连翘-姜半夏配伍样品粉末0.5 g、门氏护胃方复方样品粉末1.5 g，各6份，精密称定，分别加入连翘酯苷A和连翘苷对照品适量，按照供试品溶液Ⅰ制备方法制备，依法测定连翘酯苷A和连翘苷的含量。结果，二者的平均回收率为96.10%～99.37%（RSD≤2.36%，n=6），准确度较好，详见表2。

2.2.10 样品含量测定 取连翘单药样品粉末0.3 g、连翘-姜半夏配伍样品粉末1.0 g、门氏护胃方复方样品粉末3.0 g，各3份，精密称定，分别按供试品溶液Ⅰ制备方法制备，测定，计算样品中连翘酯苷A和连翘苷的含量，详见表3。

2.3 配伍前后各样品中连翘酯苷A和连翘苷的提取量

以连翘原药材的质量（g）为参比，计算连翘单药样品、连翘-姜半夏配伍样品、门氏护胃方复方样品中连翘酯苷A和连翘苷的平均提取量（mg/g）;以原药材提取量（按2015年版《中国药典》（一部）中“连翘”项下的含量测定方法[1]测定的量）为参比，计算连翘单药样品、连翘-姜半夏配伍样品、门氏护胃方复方样品中连翘酯苷A和连翘苷的提取率。计算公式：样品提取量=从样品中提取出的成分的量/连翘原药材的质量;原药材提取量=从连翘原药材中提取出的成分的量/连翘原药材的质量（《中国药典》方法[1]）;提取率=样品提取量/原药材提取量×100%。按《中国药典》方法对连翘原药材进行测定，得到连翘酯苷A和连翘苷的平均提取量分别为8.07、1.65 mg/g。以连翘原药材的质量为参比，得出在连翘单药样品中连翘酯苷A和连翘苷的平均提取量分别为7.82、1.10 mg/g，提取率分别为96.90%、66.67%;在连翘-姜半夏配伍样品中连翘酯苷A和连翘苷的平均提取量分别为8.20、0.90 mg/g，提取率分别为101.60%、54.55%;在门氏护胃方复方样品中连翘酯苷A和连翘苷的平均提取量分别为7.94、1.40 mg/g，提取率分别为98.39%、84.85%。可见，连翘在与姜半夏配伍后，连翘酯苷A的提取率略有增加，而连翘苷的提取率减少;在门氏护胃方复方配伍后，二者的提取率均增加。

3 讨论

从本研究结果可以得出，连翘在与姜半夏配伍后，连翘酯苷A的提取率略有增加，连翘苷的提取率略有减少;而在门氏护胃方复方配伍后，二者的提取率均略有增加，即2个成分的提取率发生了变化，尤其是连翘在与姜半夏配伍后连翘酯苷A的提取率超过了100%，推测可能是在配伍提取过程中，由于姜半夏中的皂苷等物质的增溶助溶作用，大大增加了连翘酯苷A的提取率。而连翘苷属于双环氧木脂素，存在光学异构体，煎煮过程中会受到光照、氧化和酸碱度的影响[16-17]，导致成分转化、含量降低而使提取率明显降低。因此，在与姜半夏配伍后，连翘苷可能更易受到姜半夏中酸性成分的影响，最终导致提取率降低。门氏护胃方复方中由于成分种类较多，影响2个成分提取率的因素更加交互错杂可能会增加2个成分的提取率，比如在缺连翘的阴性样品中，以及在缺连翘、姜半夏的双阴性样品的图谱中，保留时间在20 min的吸收峰明显增大，其有可能是影响连翘和姜半夏在复方配伍中成分变化的重要因素，但其成分来源及结构和性质信息有待进一步的研究。而2个成分在门氏护胃方复方配伍中的提取率增加，表明该复方配伍合理，有增强药效的作用。

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（收稿日期：2019-02-15 修回日期：2019-04-22）

（编辑：刘 萍）