朱琳超 俞颖 汪浙炯

肺炎是指由细菌、真菌、支原体、衣原体等病原微生物，以及放射线、药物过敏、免疫损伤等因素导致终末气道、肺泡及肺间质引起的炎症，其中最常见是细菌感染引起的细菌性肺炎[1]。老年人肺部细菌感染是主要死亡原因之一[2]。老年肺部感染患者的临床症状不典型，而且大部分患者WBC并不升高，易误诊、漏诊，影响及时治疗[3]。因此，早期、及时对老年细菌性肺炎患者进行诊断与鉴别至关重要。VCS激光散射技术是血细胞分析仪对WBC进行分类的方法，以电阻抗原理检测容量（volume，V）反映细胞体积，以高频探针检测电导（conductivity，C）反映细胞核内部结构，以激光检测光散射（scatter，S）反映细胞质内颗粒特性，对WBC在接近原始状态下进行分析，除了检测常规血细胞参数外，还能提供定量的WBC体积、传导率、激光散射率等VCS参数，在一定程度上能反映WBC的形态特征和内部结构[4-5]，这些参数是直接测得的电子信号，没有单位[6]。有报道在感染性疾病中VCS参数能反映中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的形态学改变[7-8]。本研究通过观察细菌性肺炎患者中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数变化，找出对疾病诊断有帮助的参数，旨在发现对老年细菌性肺炎有诊断价值的生物标志物。

1 对象和方法

1.1 对象 收集2016年1月至2018年2月我院收治的细菌性肺炎老年患者300例（平均年龄＞60岁），男140 例，女 160 例，年龄 61～84（73.5±8.7）岁，其中年龄70岁以上的患者占85%。所有患者根据临床症状、体征、病原学及胸部X线等检查明确诊断为细菌性肺炎，于入院24h内检测血常规和C反应蛋白（C-reaction protein，CRP），根据WBC水平分为 WBC≥10×109/L肺炎组134例和WBC＜10×109/L肺炎组166例；另选取同期本院健康体检者220例作为健康对照组，男100例，女 120 例，年龄 60～75（68.3±7.9）岁。临床和实验室检查排除感染性疾病、糖尿病、晚期肿瘤、使用激素和免疫抑制剂等因素，WBC和分类在正常范围内。肺炎组和健康对照组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经我院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。

1.2 方法 采用乙二胺四乙酸二钾抗凝的非可替真空采血管于早上9:00前空腹采集2ml静脉血，采用Beckman-Coulter Gen.S LH780全自动分析仪检测外周血WBC VCS参数，于2h内完成检测，收集中性粒细胞平均体积（neutrophils volume，NV）、中性粒细胞平均传导率（neutrophils conductivity，NC）、中性粒细胞平均激光散射率（neutrophils light scatter，NS）、淋巴细胞平均体积（lymphocyte volume，LV）、淋巴细胞平均传导率（lymphocyte conductivity，LC）、淋巴细胞平均激光散射率（lymphocyte light scatter，LS），以及各自平均分布宽度（NV-SD、NC-SD、NS-SD、LV-SD、LC-SD、LS-SD）。

1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件。正态分布的计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐性时两两比较采用LSD-t法，方差不齐性时两两比较采用Tamhane法。VCS参数与CRP的相关性分析采用Person相关。绘制ROC曲线评价各个指标对细菌性肺炎的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺炎患者与健康对照者中性粒细胞VCS参数的比较 WBC≥10×109/L肺炎组和WBC＜10×109/L肺炎组NV、NV-SD均明显高于健康对照组，NC明显低于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；WBC≥10×109/L肺炎组NV、NV-SD高于WBC＜10×109/L肺炎组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；3 组间 NS、NC-SD、NS-SD比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；见表1。2.2 肺炎患者与健康对照者淋巴细胞VCS参数的比较WBC≥10×109/L肺炎组和WBC＜10×109/L肺炎组LV、LV-SD、LS-SD均明显高于健康对照组，LC明显低于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；3组间LS、LC-SD比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。WBC≥10×109/L肺炎组与WBC＜10×109/L肺炎组淋巴细胞各项VCS参数比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；见表 2。

2.3 肺炎患者中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数与CRP的相关性 肺炎患者NV-SD、LV-SD与CRP均呈正相关（r=0.319、0.350，均P＜0.05），其余均无相关性，见表3。

表1 肺炎患者与健康对照者中性粒细胞VCS参数结果的比较

表2 肺炎患者与健康对照者淋巴细胞VCS参数结果的比较

表3 肺炎患者VCS参数与CRP之间的相关性

2.4 肺炎患者VCS参数的ROC曲线分析 绘制肺炎患者与健康对照组比较有统计学差异的VCS参数（NV、NC、NV-SD、LV、LC、LV-SD） 的 ROC 曲线。根据AUC可以得出NV、NV-SD、LV、LV-SD对于肺炎的诊断效能较好，其中NV-SD诊断价值最好。见图1和表4。

图1 肺炎患者NV、NC、NV-SD、LV、LC、LV-SD诊断的ROC曲线

表4 肺炎患者NV、NV-SD、LV、LV-SD的AUC、灵敏度、特异度和cut-off值

3 讨论

细菌感染机体后，WBC作为机体免疫系统的一道重要防线，除数量发生变化外，其形态也伴随着改变，如中性粒细胞核左移、中毒颗粒、空泡、包涵体，淋巴细胞体积变化、核染色质疏松等，均有助于诊断细菌感染[9-10]。血常规WBC和中性粒细胞升高是判断细菌性感染的常用指标之一，但易受患者年龄、时间、运动、情绪、月经、妊娠等生理因素影响[11]。因此寻找一种或几种在细菌性肺炎时能反应WBC形态学改变的指标，将对疾病的早期诊断和及时治疗具有重要临床意义，VCS技术与传统手工形态学检查相比，具有快速、准确、客观等优点。

研究显示典型的细菌性肺炎患者常有WBC升高[12]，但有一部分细菌性肺炎患者WBC并不升高，这与本次实验结果一致，46%细菌性肺炎患者WBC增高，而54%的患者WBC无明显变化。此外，血液病、恶性肿瘤、酒精中毒、服用儿茶酚胺类药物或某些抗生素等，均可影响炎症反应时WBC的变化。因此，影响WBC的因素较多，以它作为细菌感染的诊断指标有一定的局限性。而VCS参数能具体反映细胞内部的变化，比细胞计数更加敏感和特异。张灵玲等[13]研究发现，细菌感染患者中性粒细胞VCS参数有统计学差异，并且差异不受性别的影响。本研究分析300例细菌性肺炎患者中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数，发现NV、NV-SD、LV、LV-SD显著升高，说明细菌性肺炎患者中性粒细胞和淋巴细胞体积增大，体积差异性大。因为细菌感染时，中性粒细胞具有趋化运动和吞噬杀伤作用，出现核左移、吞噬细菌、空泡变性、包涵体、中毒颗粒等，引起中性粒细胞体积变化，VCS参数中的NV、NV-SD可以定量地检测细胞体积的变化；淋巴细胞的数量在细菌感染时一般会受到抑制，但影响因素较多，VCS参数中的LV、LV-SD可以较直观的反应细胞体积的变化。通过比较WBC≥10×109/L肺炎组和WBC＜10×109/L肺炎组，可以发现细菌性肺炎患者WBC不一定升高，但NV、NV-SD、LV、LV-SD有显著性升高，说明中性粒细胞和淋巴细胞体积的变化比数量变化更加灵敏，有利于疾病的早期诊断。VCS与CRP相关性分析，发现NV-SD和LV-SD与CRP呈正相关，ROC曲线分析可以看出，用于指示细菌性肺炎最佳的指标是NV-SD，其灵敏度和特异度为0.839和0.882；其次是 LV-SD，其灵敏度和特异度为 0.857 和0.676；再次是NV和LV，因此提示NV-SD和LV-SD与CRP联合观察可以更好的提示细菌性肺炎。Zhou等[14]研究细菌感染的肿瘤患者外周血白细胞VCS参数发现NV、MS、LV、LS和NV-SD联合诊断价值较高，灵敏度和特异度可达 0.758 和 0.6472。

综上所述，中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数能较好的反应细菌性肺炎时白细胞的形态学变化，对临床诊断具有参考价值。而且VCS参数来源于血常规分析，不需要额外检测，具有快速、经济、简便等优点，是一种新的诊断细菌感染的实验室指标。