何泽元 包堃旸 李伦 黄昌仁 幸文利

(遂宁市中心医院神经外科，四川 遂宁 629000)

微小RNAs(miRNAs)是一类长度18～22 个核苷酸非编码RNA〔1,2〕，通过与靶基因的3′UTR区互补结合，调控靶基因的表达〔3，4〕。研究证实miRNAs在多种肿瘤的发生发展中起重要作用〔5〕。脑膜瘤是常见的颅内肿瘤之一〔6〕，对miRNA在脑膜瘤中的表达及作用机制研究尚少，对脑膜瘤中miRNA表达及作用机制的研究，有助于明确脑膜瘤发病机制，指导治疗。研究表明，miRNA(miR)-8能抑制多种肿瘤细胞增殖〔7〕，而其在脑膜瘤中的研究较少。本研究通过检测脑膜瘤患者组织中miR-8的表达情况，初步探讨miR-8的生物学功能及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象 回顾性收集2016年1月至2017年1月遂宁市中心医院神经外科接受手术的22 例脑膜瘤患者手术标本，男16 例，女6 例；平均年龄(58.6±11.7)岁，良性脑膜瘤(Ⅰ级) 9例，非典型性脑膜瘤(Ⅱ级)8例，恶性脑膜瘤(Ⅲ级)5例，患者均经术后病理学检查证实为脑膜瘤，患者或家属均知情同意。

1.2 实验材料 人脑膜瘤细胞系IOMM-Lee购自中国科学院上海细胞库，DMEM培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(美国Hyclone公司)，miR-8 mimics、miR-control(大连宝生物工程有限公司)，双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司)，LipofectamineTM2000转染试剂盒、逆转录试剂盒(美国Introvigen公司)，地高辛标记的anti-miR-8探针(EXIQON公司)。目的基因引物序列：miR-8：正义链5′-TAGCAAGTCGTAAGCTA-3′,反义链5′-GTTAGTAGGTCAATCGGGATAC-3′;miR-control：正义链5′-GACCTATCGGATAAGTC-3′,反义链5′-GTCAAATCGATCCGAT-3′;RAC1：正义链5′-GTAGCACGTAAGTCAGTCA-3′,反义链5′-GTCATAGCTGGGACATCCTAAC-3′;β-actin：正义链5′-GCTAGCTAACGTGAG-3′,反义链5′-GACCACGCTGCGCATGGA-3′。

1.3 原位杂交 脑膜瘤及瘤旁组织石蜡切片常规脱蜡后，采用地高辛标记的miR-8探针进行原位杂交，37℃杂交过夜，二氨基联苯胺(DAB)显色，染色强度由同一位高年资病理科医生判断。……