吕骁 张宏英 翁恒 毛雅云 林旭

(福建医科大学教学医院福建省福州肺科医院，福建 福州 350000)

百草枯(PQ)能够造成肺泡上皮的氧化损伤从而导致呼吸衰竭，随后发生纤维化，是导致患者致死的主要原因〔1〕。然而目前PQ没有真正的药理学拮抗剂，也没有能够结合血液或其他组织中毒物的螯合剂〔2〕。尼达尼布(NIB)作为一种抑制剂能够靶向作用于多种酪氨酸激酶〔3〕，可以改善特发性肺纤维化患者肺部纤维化程度，但是对于PQ诱导的老年小鼠肺纤维化目前尚无报道。本研究探讨NIB对于PQ诱导的老年小鼠肺纤维化的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 蛋白激酶B(AKT)，细胞外调节蛋白激酶(ERK)，血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)抗体购于cell signaling technology 公司。NIB购于MCE公司。HE和Masson染色试剂盒由北京海德创业公司提供。白细胞介素(IL)-1β，肿瘤坏死因子(TNF)-α检测试剂盒购自上海蓝基生物公司；丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒购自上海翔升生物公司。

1.2 方法

1.2.1 模型建立及实验分组 20～24周龄，体重30～35 g C57BL/6老年雄性小鼠36只，由北京华孚康生物科技实验动物中心提供，随机分为假手术(Sham)组，PQ组、PQ+NIB组，每组12只。通过给予小鼠PQ 20 mg/kg灌胃来建立肺纤维化模型，Sham组则给予等量生理盐水，连续给药3 d，之后PQ+NIB组给予NIB 60 mg/kg灌胃干预。在干预7 d后每组小鼠取血后处死，收集肺组织。

1.2.2 检测方法 (1) 应用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清TNF-α、IL-1β水平，肺脏组织MDA、MPO水平。(2)留取肺组织，应用二喹啉甲酸(BCA)蛋法提取肺组织蛋白。

1.2.3 Western印迹法检测PDGFRα、PDGFRβ、磷酸化(p)-PDGFRαβ、p-AKT、p-ERK的表达水平 将提取后的蛋白进行上样，电泳，转膜，封闭，洗膜，一抗4℃过夜孵育，用洗膜液漂洗后，二抗杂交1 h，清洗后加上电化学发光剂(ECL)显色，上机检测。……