曹卉 高元慧 郑琳麟 刘克辉 黄邓高

(中南大学湘雅医学院附属海口医院 1中心实验室，海南 海口 570208;2放射科)

近年来，恶性肿瘤的免疫治疗是肿瘤治疗研究热点。细胞因子诱导的杀伤性(CIK) 细胞是一群非组织相容性复合体(MHC)限制性的、有效抗肿瘤活性的免疫细胞〔1〕。CIK细胞在体外具有较高的肿瘤细胞毒活性、广谱的肿瘤靶点和对正常组织的低毒作用，且其对部分肿瘤有确切疗效，目前在临床过继免疫治疗中有广泛应用〔2～4〕。研究显示〔5〕，CIK细胞能够作为一种细胞载体作用于肿瘤组织。通过体内观察CIK细胞的增殖、分布、靶向等生物学行为可以为研究CIK细胞抗肿瘤作用机制提供一些线索。然而，自体CIK治疗效果仍不尽人意，具体作用机制仍不明确，体内实时动态观察CIK细胞的作用效应仍然是目前研究的难点。

荧光素酶(Luc)是目前应用最广泛的活体生物发光成像报告基因之一，Luc标记的生物发光现象可在活细胞内被观测，且发光强度与标记细胞的数目呈正比，用其标记细胞后，通过活体成像系统可直接观察标记细胞在小动物体内的生长、转移等情况〔6，7〕。本研究拟构建Luc-GFP-CIK细胞系，为进一步探讨小鼠体内观察CIK细胞治疗肿瘤，标记细胞的分布及靶向示踪提供细胞来源，为肿瘤治疗的机制研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级雌性C57BL/6小鼠(广东省医学动物中心，SCXK(粤)2013-0002)，6～8 w，体重18～22 g。

1.2 细胞及主要试剂及仪器 293T细胞(中科院上海细胞所)，胎牛血清(FBS，BI公司)；无血清RPMI1640培养基(BI公司)；重组人干扰素(IFN)-γ、重组人白细胞介素(IL)-2、重组人IL-1α均购自上海生工；……