王斌 吕锦 孔敏 王虎

(1成都市第一人民医院口腔科，四川 成都 610041；2四川大学华西口腔医院放射科)

非编码RNA约占人类基因组的98%，其中包括长链非编码RNA(LncRNA)和短链非编码RNA(miRNA)〔1〕。LncRNA为长度在200个核苷酸以上的非编码RNA，miRNA的长度在19～25个核苷酸，两者均可通过转录、转录后水平及表观遗传调控基因的表达，进而参与人类多种疾病的发生发展〔2〕。自噬为真核细胞的自身降解过程，与机体衰老、神经退行性疾病、肥胖及癌症均具有密切关系〔3〕。大量研究证实，自噬在肿瘤中具有双重作用，在肿瘤的不同阶段发挥不同作用。非编码RNA核富集的转录物(NEAT)1为新发现的一种Lnc RNA〔4〕，在口腔鳞癌中的作用机制尚未完全清楚。miRNA(miR)-520b在不同癌症中发挥不同作用〔5，6〕，其在口腔鳞癌中的作用尚未完全清楚。本研究拟以口腔鳞癌细胞Tca8113为研究对象，观察抑制NEAT1、过表达miR-520b、抑制miR-520b对Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响，为口腔鳞癌的治疗提供新靶点。

1 材料与方法

1.1 材料 人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC，均购自美国菌种保存中心(ATCC)；达尔伯克改良伊格尔(DMEM)培养基、胎牛血清、四唑盐(MTT)、胰蛋白酶，均购自美国GIBCO公司；LipofectamineTM2000、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒、逆转录试剂盒，购自大连Takara公司；聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购自德国罗氏诊断有限公司；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂盒、电化学发光(ECL)发光液和RIPA蛋白裂解液，均购自碧云天生物技术公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒，购自美国Promega公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京索莱宝公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养Tca8113、HOEC，置于37℃、5% CO2的培养箱中常规培养。……