贾桂枝 王蕊 岳怡 戴红良

(锦州医科大学 1生理学教研室，辽宁 锦州 121001；2第一临床学院2016级本科；3护理学院)

肝性脑病是引起肝病患者死亡的重要原因。通过尸体解剖与动物实验发现肝性脑病中发生的脑水肿、颅内高压及脑疝是导致死亡的病理基础〔1〕。人体磁共振成像研究显示肝性脑病脑水肿属细胞性水肿，即星形胶质细胞水肿〔2〕。研究证实在严重肝病时，机体不能对氨进行有效清除，导致患者脑组织氨浓度过度升高，从而引起星形胶质细胞水肿及肝性脑病的发生〔3,4〕。Ca2+是细胞内重要的第二信使分子，之前有研究发现，氨刺激星形胶质细胞后可导致细胞内Ca2+瞬时增加，进而引起星形胶质细胞水肿〔5〕。Ca2+-磷脂依赖性蛋白激酶通路是细胞内介导各种生理、病理效应的重要信号通路〔4〕。本文旨在探讨该通路是否介导氨引起的星形胶质细胞水肿，为进一步理解肝性脑病的发病机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要实验试剂 DMEM培养基购自美国康宁公司；马血清购自Gibco公司；dBcAMP购自美国Sigma公司；Calcein/AM荧光探针购自美国Invitrogen公司；表皮生长因子受体(EGFR)抗体购自美国Cell Signaling公司；细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化(p)-ERK购自美国Santa Cruz公司；磷脂酶(PL)C抗体购自美国Abcam公司。

1.2 原代星形胶质细胞培养及分组 取出生24 h内的CD-1小鼠大脑皮层，在显微镜下剥离脑膜及血管后，将脑组织切碎，加入含20%马血清的DMEM培养液中，旋涡震荡1 min。将组织悬液先后用孔径为80 μm和10 μm的滤膜过滤。将所得到的细胞悬液接种到铺有盖玻片的24孔培养板或60 mm培养皿中，培养液为含7.5 mmol/L葡萄糖的 DMEM培养基，最初加20%马血清，置于37℃，5% CO2培养箱中培养。……